Для лечения онкологических патологий ученные пока не разработали совершенных методов терапии, способствующих выздоровлению. Фиш-анализ при раке молочной железы дает надежду на ранее диагностирование заболевания. Метод позволит женщинам начать лечение на самых ранних этапах, что и повысит шансы на исцеление.
Что это такое?
Фиш-исследование при раке молочной железы является одним из прогрессивных и актуальных средств раннего диагностирования. В переводе с английского обозначает тест на внутриклеточную флуоресцентную гибридизацию. При помощи этого ген-теста онкологи анализируют происхождение опухолей. Также анализ указывает на положительное или отрицательное влияние гена, принимающего участие в патогенезе и прогрессировании рака агрессивного типа — HER2.
Постоянное развитие научных изысканий влияет на удешевление FISH-теста и делает его доступным все большему количеству женщин.
При каких симптомах рекомендуют проведение теста?
Для определения онкологии груди рекомендуется регулярно проводить самообследование. Первые симптомы, которые должны насторожить и побудить женщину пойти к врачу:
Вернуться к оглавлению
Подготовка и сдача анализа
Никакой особой подготовки для прохождения на фиш-тест не требуется. Нельзя только употреблять спиртные напитки, как и перед сдачей любых анализов и употреблять жирную, мясную и тяжелую пищу. Еда должна быть легкой, лучше, если это будут овощные блюда и соки. Fish-тест при раке молочной железы — безвредная и безопасная процедура, которая проходит в два этапа:
- Гистологический. Под местным воздействием наркоза проводится биопсия биоматериала из груди. Полученный материал обрабатывается специальным красящим веществом с флуоресцентными маркерами. По своим химическим качествам эти маркеры связываются исключительно с обозначенными хромосомами и их наборами в клетках. В результате исследований видны наиболее окрашенные маркером хромосомные наборы, что и указывает на степень изменений в геноме по онкологической принадлежности.
- Фиш-анализ. В вену проводят инфузию компонента ДНК — дезоксирибонуклеиновую кислоту, окрашенную специфическими маркерами. Метки-маркеры встраиваются в геномы на клеточном уровне. Исследование проводится в присутствии пациентки, а итоги анализа предоставляются сразу.
Вернуться к оглавлению
Что показывают результаты?
Fish-анализ при раке молочной железы показывает такие итоги:
- Гистологическое исследование. Результаты выставляются по насыщенности маркеров на участках хромосомных наборов. Число 1 и менее означает, что опасности нет. Цифра обозначает пограничное состояние, требующее дополнительных анализов. Числом 3 обозначают развитие онкологического процесса.
- Фиш-реакция при раке молочной железы. Отрицательный результат реакции означает, что молекулы дезоксирибонуклеиновой кислоты не принимают участия в патогенезе атипичных клеток. При развитии злокачественного образования ген HER2 не влияет на раковую клетку. При положительной реакции в два раза повышается скорость деления генов, участвующих в патогенезе онкологических молекул.
Вернуться к оглавлению
Достоинства и недостатки
Плюсом фиш-анализа является:
- Скорость. Результаты готовы в течение нескольких дней.
- Обнаружение предрасположенностей к другим патологиям.
- Безопасность. Биопсия проводится с наименьшим травмирование пациентки.
- Выявление склонности к раковым заболеваниям.
Фиш-тесты согласно источнику maximus2012.nethouse.ru/static/doc/0000/0000/0349/349982.sqrj348c07.pdf позволяют установить, насколько организм склонен к онкологии.
К минусам можно отнести такие показатели:
- Специфичность маркеров. Их не применяют на некоторых зонах хромосомного набора.
- Не всегда правильные результаты, иногда случаются ошибки.
- Высокая стоимость процедуры.
При наименьших подозрениях на изменение молочных желез необходимо обратиться к маммологу. Существует целый спектр методов исследований на онкологию, в том числе и фиш-тест. Чем раньше будет обнаружен рак или предрасположенность к нему, тем раньше начнется лечение, и тем более благоприятным будет прогноз выживаемости.
Современный метод цитогенетического анализа, позволяющий определять качественные и количественные изменения хромосом (в том числе транслокации и микроделеции) и используемый для дифференциальной диагностики злокачественных заболеваний крови и солидных опухолей.
Флуоресцентная гибридизация in situ
Fluorescence in-situ hybridization
Флуоресцентная гибридизация in situ.
Какой биоматериал можно использовать для исследования?
Образец ткани, образец ткани в парафиновом блоке.
Как правильно подготовиться к исследованию?
Подготовки не требуется.
Общая информация об исследовании
Флуоресцентная гибридизация in situ (FISH, от англ. fluorescence in—situ hybridization) – это один из самых современных методов диагностики хромосомных аномалий. Он основан на использовании ДНК-проб, меченных флуоресцентной меткой. ДНК-пробы представляют собой специально синтезированные фрагменты ДНК, последовательность которых комплементарна последовательности ДНК исследуемых аберрантных хромосом. Таким образом, ДНК-пробы различаются по составу: для определения разных хромосомных аномалий используются разные, специфические ДНК-пробы. ДНК-пробы также различаются по размеру: одни могут быть направлены к целой хромосоме, другие – к конкретному локусу.
В ходе процесса гибридизации при наличии в исследуемом образце аберрантных хромосом происходит их связывание с ДНК-пробой, которое при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как флуоресцентный сигнал (положительный результат FISH-теста). При отсутствии аберрантных хромосом несвязанные ДНК-пробы в ходе реакции «отмываются», что при исследовании с помощью флуоресцентного микроскопа определяется как отсутствие флуоресцентного сигнала (отрицательный результат FISH-теста). Метод позволяет оценить не только наличие флуоресцентного сигнала, но и его интенсивность и локализацию. Таким образом, FISH-тест – это не только качественный, но и количественный метод.
FISH-тест обладает рядом преимуществ по сравнению с другими методами цитогенетики. В первую очередь, исследование FISH может быть применено как к метафазным, так и к интерфазным ядрам, то есть к неделящимся клеткам. Это основное преимущество FISH по сравнению с классическими способами кариотипирования (например, окрашиванием хромосом по Романовскому-Гимзе), которые применяются только к метафазным ядрам. Благодаря этому исследование FISH является более точным методом для определения хромосомных аномалий в тканях с низкой пролиферативной активностью, в том числе в солидных опухолях.
Так как в FISH-тесте используется стабильная ДНК интерфазных ядер, для исследования могут быть использованы самые различные биоматериалы – аспираты тонкоугольной аспирационной биопсии, мазки, аспираты костного мозга, биоптаты и, что немаловажно, сохраненные фрагменты ткани, например гистологические блоки. Так, например, FISH-тест может быть с успехом выполнен на повторных препаратах, полученных из гистологического блока биоптата молочной железы при подтверждении диагноза «аденокарцинома молочной железы» и необходимости определения HER2/neu-статуса опухоли. Следует особо подчеркнуть, что в данный момент исследование FISH рекомендовано в качестве подтверждающего теста при получении неопределенного результата иммуногистохимического исследования опухоли на онкомаркер HER2/neu(ИГХ 2+).
Другим преимуществом FISH является его способность определять микроделеции, которые не выявляются с помощью классического кариотипирования или ПЦР. Это имеет особое значение при подозрении на синдром Ди Джорджи и велокардиофациальный синдром.
FISH-тест широко используется в дифференциальной диагностике злокачественных заболеваний, в первую очередь в онкогематологии. Хромосомные аномалии в сочетании с клинической картиной и данными иммуногистохимического исследования являются основой классификации, определения тактики лечения и прогноза лимфо- и миелопролиферативнх заболеваний. Классическими примерами являются хронический миелолейкоз – t (9;22), острый промиелоцитарный лейкоз – t (15;17), хронический лимфолейкоз – трисомия 12 и другие. Что касается солидных опухолей, наиболее часто FISH-исследование применяется при диагностике рака молочной железы, мочевого пузыря, толстой кишки, нейробластомы, ретинобластомы и других.
Исследование FISH также может быть использовано в пренатальной и преимплантационной диагностике.
FISH-тест часто проводят в сочетании с другими методами молекулярной и цитогенетической диагностики. Результат этого исследования оценивают в комплексе с результатами дополнительных лабораторных и инструментальных данных.
Для чего используется исследование?
- Для дифференциальной диагностики злокачественных заболеваний (крови и солидных органов).
Когда назначается исследование?
- При подозрении на наличие злокачественного заболевания крови или солидных опухолей, тактика лечения и прогноз которых зависит от хромосомного состава опухолевого клона.
Что означают результаты?
- Наличие в исследуемом образце аберрантных хромосом.
- Отсутствие в исследуемом образце аберрантных хромосом.
Что может влиять на результат?
- Количество аберрантных хромосом.
- 19 Иммуногистохимическое исследование клинического материала (с использованием 1 антитела)
- 20 Иммуногистохимическое исследование клинического материала (с использованием 4 и более антител)
- 51 Определение HER2 статуса опухоли методом FISH
- 12 Определение HER2 статуса опухоли методом СISH
Кто назначает исследование?
Онколог, педиатр, акушер-гинеколог, врач-генетик.
Литература
- Wan TS, Ma ES. Molecular cytogenetics: an indispensable tool for cancer diagnosis. Anticancer Res. 2005 Jul-Aug;25(4):2979-83.
- Kolialexi A, Tsangaris GT, Kitsiou S, Kanavakis E, Mavrou A. Impact of cytogenetic and molecular cytogenetic studies on hematologic malignancies. Chang Gung Med J. 2012 Mar-Apr;35(2):96-110.
- Mühlmann M. Molecular cytogenetics in metaphase and interphase cells for cancer and genetic research, diagnosis and prognosis. Application in tissue sections and cell suspensions. Genet Mol Res. 2002 Jun 30;1(2):117-27.
Рак молочной железы является самым частым онкологическим заболеванием у женщин. Поэтому данной проблеме уделяется очень много внимания со стороны врачей и ученых. На сегодняшний день методы диагностики рака молочной железы существенно изменились и усовершенствовались. Одним из таких методов является флуоресцентная гибридизация in situ или FISH (фиш).
Зачем нужен FISH-анализ?
Рак молочной железы может иметь различный гормональный статус, который очень важно определить для подбора дальнейшего лечения. Выделяют несколько биологических маркеров опухоли, одним из которых является рецептор HER2-neu. Он отвечает за рост и деление клеток.
Когда назначается FISH тест
Определить статус HER2-neu в клетках рака молочной железы можно разными способами. Наиболее простым и дешевым является иммуногистохимическое исследование. Однако в части случаев оно не дает точного ответа. При анализе результатов, врач определяет статус HER2-neu в баллах или плюсах (+).
- 0-1+ — результат негативный.
- 2+ — статус не определен.
- 3+ — статус позитивный.
FISH тест назначается при неопределенном результате иммуногистохимического исследования (2+). В этом случае нельзя достоверно оценить экспрессию гена, следовательно, нельзя быть уверенным, что пациенту поможет соответствующее лечение.
На сегодняшний день не существует FISH-тестов, позволяющих проводить раннюю диагностику рака молочной железы. Это исследование показано тем женщинам, у которых уже опухоль выявлена, удалена и которым требуется подобрать лечение.
Подготовка к тесту и алгоритм его проведения
Для того чтобы провести FISH исследование, необходимо получить образец опухолевых клеток. Как правило, к тому моменту, когда женщине назначается данный анализ, она уже прошла все необходимые диагностические процедуры, в том числе биопсию. Однако в некоторых случаях требуется повторное проведение биопсии молочной железы, о чем врач предупредит заранее.
На следующем этапе обязательно проводится иммуногистохимическое исследование. Во-первых, оно более дешевое и простое, во-вторых, оно тоже с большой точностью может помочь определить статус HER2-neu в молочной железе. Если результат иммуногистохимии оценивается в 2+, то материал отправляется на FISH исследование.
Тест проводится на таком же материале молочной железы, который использовался при проведении иммуногистохимии. Метод FISH подразумевает использование ДНК-зондов, которые связываются с определенными мишенями в клетке. Для того чтобы зонд можно было визуализировать, его помечают специальными флуоресцентными красителями.
При оценке статуса HER2-neu интерес представляет 17 хромосома, на которой расположен ген, который кодирует данный белок. В процессе проведения FISH теста можно оценивать как количество хромосом, так и количество копий гена в клетках рака молочной железы. Для этого ткань проходит пробоподготовку и помечается ДНК-зондом, после чего врач оценивает срез под флуоресцентным микроскопом и дает свое заключение.
Достоинства и недостатки FISH теста
В настоящее время метод FISH позволяет с высокой точностью определить HER2-статус опухоли молочной железы и подобрать необходимое лечение. Такая необходимость возникла с разработкой лекарственного препарата Трастузумаб (Герцептин). Согласно исследованиям, при назначении его на ранних стадиях рака молочной железы удается снизить вероятность рецидива заболевания на 50%, а показатели смертности — на 30%, что является очень хорошим результатом.
Препарат оказывает действие только на те клетки рака молочной железы, которые отличаются высокой гиперэкспрессией HER2-neu. В остальных случаях Герцептин будет неэффективен. Среди других достоинств, которыми обладает тест FISH, можно отметить относительно быстрые сроки выполнения анализа (около 2-3 дней), высокую чувствительность и специфичность.
Для проведения FISH теста требуется дорогостоящее оборудование (флуоресцентный микроскоп) и расходные материалы, поэтому его пока предлагают лишь крупные клиники и диагностические центры. Кроме того, стоимость самого исследования также является высокой, но при этом полностью оправдывает себя.
Тест FISH — это один из методов современной диагностики рака молочной железы, который применяется только в специфических ситуациях. Несмотря на высокую точность, его не требуется назначать всем пациентам подряд, но при наличии показаний, этот метод может существенно помочь в выборе метода лечения и улучшить прогноз при раке молочной железы.