ПЦР (полимеразная цепная реакция) диагностика — метод выявления ДНК вирусных агентов и инфекционных возбудителей в биоматериале пациента. Методика активно применяется в венерологической, урологической практике и практике врачей-инфекционистов.
Если не вдаваться в технические сложности, суть метода заключается в многократном воспроизведении ДНК при определенных температурных режимах. В результате диагносты могут получить полноценную цепочку ДНК в количестве достаточном для изучения и определения патогенного агента. Методика позволяет обнаружить следы генетического материала того или иного возбудителя в крови, моче, иных биологических образцах.
Анализ ПЦР — наиболее точный метод диагностики ИППП
При подозрениях на какие заболевания назначается исследование?
Многие заболевания, передающиеся половым путем имеют слабую, смазанную клиническую картину. Это, например, цитомегалия (поражение вирусом герпеса пятого типа), уреаплазмоз. Выраженных симптомов данные и некоторые другие болезни не имеют, либо их можно списать на проявления иных недугов. В данном случае метод ПЦР незаменим и применяется наравне с ИФА (поиском антител в крови к тем или иным возбудителям).
Вначале выделяется ДНК/ РНК, затем идет ПЦР
Какие же патологии можно выявить посредством ПЦР? Сюда входят:
- уреаплазмоз;
- хламидиоз;
- гонорея;
- сифилис;
- поражение герпетическими агентами всех типов;
- ВИЧ-инфекция;
- гепатит подтипов B и C;
- кандидоз;
- цитомегаловирусная инфекция (стоит выделить отдельно от иных герпетических возбудителей);
- трихомониаз;
- поражение вирусом папилломы человека.
Теоретически, полимеразная цепная реакция позволяет выявить много больше возбудителей, однако в контексте венерических заболеваний перечень будет именно таким.
Подготовка к исследованию
Методы подготовки стандартны и не требуют больших усилий от пациента:
Перед направлением на анализ ПЦР врач даст рекомендации по подготовке
- Лучше всего сдавать анализы в период обострения того или иного инфекционного заболевания, реального или вероятно существующего. Так будет проще обнаружить генетический материал вируса.
- За 3 часа до сдачи анализа рекомендуется не мочиться (если речь идет о сдаче мочи или мазке из уретры).
- Перед сдачей анализа рекомендуется провести гигиену половых органов (также, если речь идет о сдаче мочи или мазке).
- Отказаться от сексуальных контактов (за 2-3 дня до обследования).
- За неделю до исследования исключается прием антибактериальных препаратов. Они могут смазать клиническую картину.
Как производится забор биоматериала
Для начала нужно определиться, какой биоматериал подлежит исследованию. Может быть произведен забор:
- мочи;
- крови;
- уретральных выделений;
- секрета предстательной железы (редко).
Зонд вводят в уретру и поворачивают
Моча сдается в стерильной пластиковой таре. В тот же день производится анализ биоматериала. Кровь забирают из вены. Что касается уретральных выделений, их собирают одноразовым зондом с тампоном на конце.
Зонд вводится в уретру на глубину 2-3 см, круговым движением собирают секрет или экссудат, помещают тампон в стерильную посуду. Сам по себе процесс у мужчин может быть несколько болезненным, но вполне терпимым.
Анализ проводится 1-2 дня. В исключительных случаях врач может порекомендовать пациенту пройти исследование повторно, спустя полторы-две недели. Но речь лишь о сомнительных клинических ситуациях.
Бояться мужчинам совершенно нечего. В процессе сдачи возможны минимальные дискомфортные ощущения, но здоровье того стоит.
ПЦР – наиболее совершенный, точный и оперативный метод диагностики, позволяющий выявить возбудителей различных заболеваний в любом биоматериале, содержащем ДНК. Он был внедрен в медицинскую практику чуть больше 30 лет назад и до сих пор считается экспериментальным. Метод относится к области молекулярной биологии, его изобретатель был удостоен Нобелевской премии. Для выявления ЗППП ПЦР мазок у мужчин берут из уретры. Это может быть соскоб эпителия, проба спермы или простатического сока. Возбудитель будет обнаружен в любом состоянии (живой или погибший) даже по единственной молекуле. Основное условие точности результата – наличие соответствующего оборудования и реактивов, чистота забора биоматериала.
Суть метода
Для анализа метом ПЦР из биоматериала выделяют фрагменты нуклеиновых кислот (ДНК и РНК потенциальных возбудителей), затем добавляют вещества-катализаторы: синтетический фрагмент ДНК искомой инфекции (специально разработанные эталонные маркеры, ДНК-праймеры) и ферменты. Их задача – найти ДНК заданной инфекции, при ее наличии, и заставить многократно делиться. Это позволяет идентифицировать возбудителя, визуализировать его. Процесс происходит в специальной емкости – амплифликаторе, который автоматически меняет температуру от 50 до 95 ˚С. Без этого ДНК делиться не будет.
Копируется только тот участок ДНК, который соответствует заданным условиям. Как только праймер находит нужный участок, он запускает процесс его копирования – это и есть полимеразная цепная реакция. Деление происходит быстро: ДНК копируется за 3 минуты (один цикл), то есть примерно через 40 минут количество фрагментов будет достаточным для идентификации.
Анализ методом ПЦР может быть произведен в режиме реального времени или в обычном режиме. В первом случае контроль за количеством фрагментов ДНК осуществляется после каждого цикла деления. Чем больше изначальное число клонируемых молекул, тем больше будет копий − то есть можно дать количественную оценку инфекционного поражения.
Краткая схема метода ПЦР
Основные преимущества метода ПЦР
К основным достоинствам метода ПЦР относятся:
- Универсальность. Для поиска ДНК и РНК возбудителя пригоден любой биоматериал, например: кровь, моча, уретральная слизь, выделения, сперма, соскобы эпителиальных клеток с различных областей (ноздри, глотка, анус).
- Высокая чувствительность. При помощи метода ПЦР можно обнаружить возбудителя по единственной клетке, причем в тех случаях, когда другие способы диагностики (бактериологическая, иммунологическая, микроскопическая) бессильны.
- Специфичность. Методом ПЦР выявляют уникальный фрагмент, присущий исключительно искомому объекту. Не может быть одинаковой ДНК у разных типов инфекции. ПЦР не ошибается в отличие от ИФА (иммуноферментный анализ), при котором причиной неверного результата нередко становятся перекрестно-реагирующие антигены.
- Непосредственное определение возбудителя. Если результат положительный, то инфекция точно присутствует в какой-либо форме.
- Высокая скорость исполнения. Исследование длится от 1 до 4,5 часов. Заболевание можно выявить в зачаточной стадии до появления клинических признаков, пока инфекция не успела распространиться.
- Диагностика любого типа инфекции: при острой, скрытой, хронической стадиях болезни, будут обнаружены даже единичные вирусы и бактерии. ПЦР на 6-7% чаще выявляет микробов, чем бакпосев, поскольку в последнем случае требуется несколько дней для выращивания культуры, клетки могут погибнуть. Некоторые микроорганизмы вообще не поддаются культивации в искусственной питательной среде.
Из одной пробирки при помощи метода ПЦР можно выявить сразу несколько возбудителей (хламидии, микоплазмы, уреаплазмы, трихомонады), не требуется забор нескольких порций биоматериала.
Методом ПЦР можно обнаружить атипичные формы бактерий. Это внутриклеточные паразиты, которые могут долго и бессимптомно жить в организме. Симптоматика в таких случаях отсутствует или стерта.
Из недостатков метода ПЦР:
- Обнаруживаются ДНК не только активных, но и погибших вирусов и бактерий.
- Тест-система (образцы) рассчитаны на стандартные, известные науке виды микроорганизмов, поэтому в случае их мутации или появления нового типа результат метода ПЦР окажется ложным.
Случаи неверных результатов крайне низки.
Подготовка и забор материала
Для диагностики урогенитальных инфекций подходят следующие биоматериалы:
- Мазок (соскоб эпителия) из уретры;
- Сок простаты;
- Сперма;
- Кровь (при анализе на цитомегаловирус, гепатиты, герпес, ВИЧ);
- Моча.
При признаках мочеполовых инфекций и на профилактических осмотрах чаще всего для исследования берут мазок из уретры. Для сохранения всей присутствующей на ее стенках микрофлоры за двое суток следует воздержаться от секса, за 3-4 часа не мочиться. За 2-3 дня нужно воздержаться от приема алкоголя, острых, копченых, соленых блюд (чтобы не раздражать стенки мочевого пузыря и уретру).
Процесс забора мазка из уретры может быть неприятным, но терпимым. Остаточные явления в виде болей при мочеиспускании проходят сами в течение двух дней
Результат
Метод ПЦР позволяет не только выявить возбудителя, но и определить его количество в организме. Количественный анализ особенно важен для контроля эффективности лечения хронических заболеваний.
В ряде случаев ПЦР выявляет следы возбудителя у внешне совершенно здорового пациента, без каких-либо клинических признаков. Скорее всего, происходит инкубационный период либо мужичина является бессимптомным носителем, что опасно для его партнерши.
Анализ биоматериала на половые инфекции методом ПЦР проще всего сделать в одной из сетевых лабораторий:
В данных сетевых лабораториях минимальный риск ложноположительных и ложноотрицательных результатов.
Заключение
Метод ПЦР позволяет точно установить наличие патогенов в биоматериале, тип которого зависит от симптомов. При дискомфорте в области паха, болевых ощущениях внизу живота сдают простатический сок и мочу, чтобы исключить простатит или цистит. Если беспокоит жжение при мочеиспускании, эякуляции, выделения из уретры, то информативным будет соскоб из уретры. Урогенитальный мазок для анализа методом ПЦР целесообразно сдавать всем мужчинам не реже одного раза в полтора года. Это позволит предотвратить развитие простатита, спровоцированного бессимптомной активностью активно-патогенной микрофлоры.