Простатит и фрагментация днк

УРОВЕНЬ ФРАГМЕНТАЦИИ ДНК В СПЕРМАТОЗОИДАХ ЧЕЛОВЕКА ПРИ ВАРИКОЦЕЛЕ И ПРОСТАТИТЕ

Варикоцеле и простатит относятся к наиболее распространенным андрологическим заболеваниям, которые могут сопровождаться сниженной продукцией сперматозоидов, ухудшением их качества и повышением риска бесплодия. Целью настоящей работы было оценить у мужчин активного репродуктивного возраста, страдающих простатитом или варикоцеле, индекс фрагментации ДНК сперматозоидов (ИФД) и основные показатели фертильности спермы (концентрация, подвижность и морфология сперматозоидов), а также взаимосвязь между ними. Оценку фрагментации ДНК сперматозоидов проводили методом SCSA (sperm chromatin structure assay) с использованием проточной цитометрии, параметры спермограммы оценивали в соответствии с рекомендациями ВОЗ. Показано, что у мужчин с простатитом (n=9) и варикоцеле (n=22) ИФД был значительно выше, чем в группе контроля (n=22). Установлено негативное влияние этих заболеваний на концентрацию и долю подвижных сперматозоидов в эякуляте. Полученные данные предполагают, что ухудшение качества спермы при варикоцеле и простатите может быть обусловлено не только патоспермией, но и нарушением, по крайней мере частично, целостности ДНК сперматозоидов. Оценка фрагментации ДНК сперматозоидов может быть рекомендована к использованию в лабораторной диагностике для прогноза фертильности мужчин, страдающих бесплодием. Важным фактором, влияющим на фертильность мужчины и здоровье его детей, является целостность ДНК в сперматозоидах. Нарушения в генетическом материале сперматозоидов встречаются у мужчин довольно часто. Они включают хромосомные мутации (делеции и анеуплоидию), эпигенетическую модификацию ДНК или гистонов, генные или точечные мутации, окисление нуклеотидных оснований и фрагментацию ДНК. Целостность ДНК в сперматозоидах может нарушаться при дифференцировке мужских гамет при переходе от нуклеосомной организации хроматина к протаминовой укладке, что приводит к возникновению разрывов ДНК, часть из которых остается нерепарированной в зрелых сперматозоидах. Фрагментация ДНК в дифференцирующихся половых клетках семенников может быть частью апоптотического процесса, т.е. фрагментированная ДНК в эякуляторных сперматозоидах может стать результатом незавершенного процесса апоптоза. Еще одна возможная причина нарушения целостности ДНК в сперматозоидах — это оксидативный стресс, обусловленный избыточной продукцией свободных радикалов. Оксидативный стресс некоторыми авторами рассматривается как главный механизм, приводящий к появлению в эякуляте сперматозоидов с фрагментированной ДНК. При некоторых патологических состояниях, связанных с воспалением, масса незрелых половых клеток и лейкоцитов попадает в эякулят, где служит основным источником свободных радикалов, усиливая процесс фрагментации ДНК в зрелых сперматозоидах.

На сегодняшний день при подозрении на мужское бесплодие основным методом исследования остаётся спермограмма, которая позволяет оценить морфологические характеристики сперматозоидов и их подвижность. Однако бесплодный брак может наблюдаться у 15% мужчин с нормальной спермограммой [1].

Одна из причин этого феномена – фрагментация ДНК сперматозоидов, для которой характерны принципиальные отличия от генетического аппарата других видов клеток организма. Прежде всего, это сверкомпактность хроматина, которая достигается за счёт специальных белков (протаминов), содержащих большое количества аргинина. Другая принципиальная особенность ДНК сперматозоидов – полное отсутствие внутриклеточных механизмов её репарации [2, 3, 4, 5]

Причины возникновения фрагментации ДНК сперматозоидов до сих пор до конца не изучены. Она может возникать при дефектах ремоделирования хроматина в процессе созревания сперматозоидов, вследствие апоптоза, а также в результате оксидативного стресса [6, 7, 8].

В норме большая часть кислорода, поступающего в клетку, метаболизируется с помощью фермента митохондрий цитохромоксидазы. В процессе данной реакции 2-5% молекул кислорода могут присоединять дополнительный электрон, который в норме нейтрализуется ферментом супероксиддисмутазой. При патологических состояниях, которые сопровождаются повышением образования свободных радикалов или снижением способности к их нейтрализации, такие соединения могут наносить повреждения клеткам [9, 10].

Следствием этого процесса становится истощение антиоксидантной защиты организма, к которой также относят глицин и цинк – ингибиторы процессов перикисного окисления липидов [13].

При заболеваниях мужской репродуктивной системы, таких как варикоцеле и простатит отмечается повышение индекса фрагментации ДНК, что может приводить к нарушению фертильности [14].

Препарат обладает противовоспалительным эффектом [15]. При его использовании отмечено снижение количества антиспермальных антител в эякуляте, а также улучшение подвижности и морфологических характеристик сперматозоидов [16].

*Импакт фактор за 2018 г. по данным РИНЦ

Журнал входит в Перечень рецензируемых научных изданий ВАК.

Читайте в новом номере

В настоящее время около 15–20% всех наступивших беременностей заканчиваются неудачно — это либо беременность, либо невынашивание (выкидыш) [1, 2]. Также к данной категории можно отнести и внематочную беременность. Все эти состояния относятся к репродуктивным потерям беременности. Значительную долю среди них составляют неудачные попытки применения программ вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ) — неразвивающиеся беременности после экстракорпорального оплодотворения (ЭКО) и/или интрацитоплазматической инъекции сперматозоида (ИКСИ).

Принято считать, что в абсолютно здоровой супружеской паре может встречаться не более 3 случаев невынашивания беременности в сроках ранее 20 нед. беременности, и это не требует лечения. Однако при превышении этого порога такое состояние называют привычным невынашиванием беременности (ПНБ) или привычным выкидышем. Существует мнение, что этот диагноз должен ставиться уже после 2 произошедших выкидышей, поскольку вероятность последующего невынашивания беременности после 2 и 3 выкидышей схожа [2]. Частота ПНБ в популяции составляет 2% от числа беременностей. Риск повторного невынашивания после 2 выкидышей составляет 24%, после 3 -30%, после 4 — 40% [3, 4].

Основными причинами ПНБ на сегодняшний день являются: инфекции мочеполовой системы, нарушения гемостаза (предрасположенность к тромбофилиям, нарушения фолатного цикла и др.), антифосфолипидный синдром, совпадения в системе Ь^А (II класса), хромосомные анеуплоидии [4, 5].

В то же время остается невыясненной роль мужского фактора в ПНБ. До сих пор считалось, что у мужчин необходимо только лечение заболеваний мочеполовой системы. Следовало добиться эрадикации возбудителей инфекций, передающихся половым путем (хламидии, микоплазмы, уреаплазмы, гарднереллы ). Однако в последнее время были выяснены новые обстоятельства.

Как известно, с возрастом у женщин снижаются овариальный резерв и целостность ооцитов. У мужчин существует способность поддерживать определенный уровень фертильности в течение всей жизни, однако эта функция ухудшается постепенно. Наблюдаются снижение уровня половых гормонов, ухудшение сексуальной функции, ухудшение показателей сперматогенеза и, как следствие, снижение фертильности. Кроме того, увеличиваются неблагоприятные исходы беременности, мутации сперматозоидов de novo (растут на 4% в год), чаще встречаются хромосомные анеуплоидии. Все это приводит к репродуктивным потерям беременности или врожденным дефектам и заболеваниям у потомства [6].

Возрастные изменения обычных параметров спермы проявляются в сокращении объема спермы, уменьшении общего количества сперматозоидов, ухудшении подвижности и морфологии сперматозоидов. При этом концентрация сперматозоидов достоверно не меняется. Многие изменения до настоящего времени остаются предметом дискуссии. Этиология изменений связана с накоплением с возрастом сопутствующих заболеваний, таких как: сосудистая недостаточность (диабет, артериальная гипертензия), хронические инфекции (простатит и др.), ожирение, гормональная недостаточность. Однако до конца этиология все еще четко не определена [6].

L. Vagnini et al. оценивали влияние возраста на качество спермы. Оказалось, что с возрастом уменьшается количество и ухудшается качество сперматозоидов, увеличивается количество сперматозоидов с большими ядерными вакуолями (более 50% объема ядра), значительно возрастает степень фрагментации ДНК сперматозоидов (TUNEL, p ® ). До и после исследования проводился анализ спермы. В группу контроля вошли 40 мужчин с бесплодием, не получавшие никакой терапии. У них также определялись изменения показателей по сравнению с исходными данными.

Было установлено, что результаты значительно улучшились в основной группе после 3 мес. лечения. Медиана показателей анализа изменилась с 56% в исходной точке до 74% в конце исследования (р Литература

1. Сидельникова В.М., Сухих Г.Т. Невынашивание беременности: Руководство для практикующих врачей, 2010, МИА. 986 с.
2. Сидельникова В.М, Привычная потеря беременности. М.: Триада — Х, 2002. 304 с, 3. Тетруашвили Н.К. Ранние потери беременности (иммунологические аспекты, пути профилактики и терапии): Автореф. дис. докт. мед. наук. М., 2010.
3. Тихомиров АЛ., Лубнин Д.М. Привычное невынашивание беременности: причины, диагностика и современные подходы к терапии // Фарматека. 2004. № 1 (80), С. 5-6.
4. Ааджанова А.А. Современные подходы к диагностике и лечению антифосфолипидного синдрома в клинике невынашивания беременности// Вестн. Рос. ассоц. акуш.-гин. 1999, № 2. С. 40-45.
5. Belloc S., Hazout A, Zini A. et al. How to overcome male infertility after 40: Influence of paternal age on fertility // Maturitas, 2014 May, Vol. 78 (1). Р. 22-29.
6. Vagnini L, Baruffi R.L, Mauri A.L. et A. The effects of male age on sperm DNA damage in an infertile population // Reprod Biomed Online, 2007 Nov. Vol. 15 (5). Р. 514-519.
7. Span M,, Bonde J.P., Hjllund H.I, et al. Sperm chromatin damage impairs human fertility. The Danish First Pregnancy Planner Study Team // Fertil Steril, 2000 Jan, Vol. 73 (1). P. 43-50.
8. Zini A, Albert O,Robaire B. Assessing sperm chromatin and DNA damage: clinical importance and development of standards //Andrology, 2014 May, Vol. 2 (3). P. 322-325.
9. Fernndez-Gonzalez R, Moreira P.N, Prez-Crespo M. et al. Long-term effects of mouse intra-cytoplasmic sperm injection with DNA-fragmented sperm on health and behavior of adult offspring // Biol Reprod. 2008Apr. Vol. 78 (4), P. 761-772.
10. Simon L, Liu L, Murphy K. et al. Comparative analysis of three sperm DNA damage assays and sperm nuclear protein content in couples undergoing assisted reproduction treatment // Hum Re-prod. 2014 May. Vol. 29 (5). P. 904-917.
11. Khadem N, Poorhoseyni A, Jalali M. et al. Sperm DNA fragmentation in couples with unexplained recurrent spontaneous abortions //Andrology. 2014 Mar. Vol. 46 (2). P. 126-130, 13. Robinson L, Gallos ID, Conner S.J. et al. The effect of sperm DNA fragmentation on miscarriage rates: a systematic review and meta-analysis // Hum Reprod. 2012, Vol. 2 (10). P. 2908-2917.
12. Tarfn J.J, Garcfa-Perez M.A, Cano A. Assisted reproductive technology results: why are birth percentages so low?// Mol Reprod Dev. 2014 Jul. Vol. 81 (7). P. 568-583.
13. Zini A., Libman J. Sperm DNA damage: importance in the era of assisted reproduction // Curr Opin Urol. 2006 Nov, Vol. 16 (6). P. 428-434.
14. Gosalvez J, Lopez-Fernandez C, Hermoso A. et al. Sperm DNA fragmentation in zebrafish nio rerio) and its impact on fertility and embryo viability — Implications for fisheries and aquaculture // Aquaculture. 2014. Vol. 433. P. 173-182.
15. Moskovtsev S.l., Mullen J.B, Lecker I. et a. Frequency and severity of sperm DNA damage in patients with confirmed cases of male infertility of different aetiologies // Reprod Biomed Online. 2010. Vol. 20. P. 759-763.
16. Baazeem A, Belzie E, Ciampi A. et al. Varicocele and mae factor infertility treatment: a new meta-anayss and review of the role of varicocele repair // Eur Urol. 2011. Vol. 60. P. 796-808.
17. Ficarra V., Crestani A., Novara G. Varicocele repair for infertility: what is the evidence? // Curr Opin Urol. 2012. Vo. 22 (6). P. 489-494.
18. Smit M, Romijn J.C, Wildhagen M.F. et al. Decreased sperm DNA fragmentation after surgical varicocelectomy is associated with increased pregnancy rate // J Urol. 2013 Jan. Vol. 189 (1 Suppl). P. 146-150.
19. Dabaja A., Wosnitzer M., Goldstein M. Varicocele and hypogonadism // Curr Urol Rep. 2013 Aug. Vol. 14 (4), P. 309-314.
20. Mansour Ghanaie M., Asgari S.A., Dadrass N. et al. Effects of varicocele repair on spontaneous first trimester miscarriage: a randomized clinical tra // Urol J. 2012. Vol. 9 (2). P. 505-513.
21. Zini A, Sigma M. Are tests of sperm DNA damage clinically useful? // Pros and cons. J Androl. 2009, Vo. 30. P. 219-229.
22. Zampieri N., Zamboni C., Ottolenghi A. The role of lifestyle changing to improve the semen quality in patients with varicocele // Minerva Urol Nefrol. 2008 Dec. Vol. 60 (4). P. 199-204.
23. Adams J.A., Galloway T.S., Mondal D. et al. Effect of mobile telephones on sperm quality: a systematic review and meta-analyss // Environment Int. 2014. Vol. 70. P. 106-112.
24. Cavallini G. Male idiopathic oligoasthenoteratozoospermia //Asian J Androl. 2006 Mar. Vol. 8 (2). P. 143-157.
25. Stearns G., Turek P.J. Avoiding toxins including spermatotoxic medications // Semin Reprod Med. 2013. Vo. 31 (4). P. 286-292.
26. Howell M.G, Mackenzie-Proctor R, Brown J. et al. Antioxidants for male subfertility // Cochrane Database Syst Rev. 2014. Vol. 12. CD007411.
27. Yagci A. et al. Spermatozoa bound to solid state hyaluronic acid show chromain structure with high DNA chan integrity: an acridine orange fluorescence study // J Androl. 2010. Vol. 31 (6). P. 566-572.
28. Breznik B. et al. Are sperm DNA fragmentation, hyperactivation, and hyaluronan-binding ability predictive for fertilization and embryo development in in vitro fertilization and intracytoplasmic sperm injection?// FertHSteril. 2013. Vol. 99 (5). P. 1233-1241.
29. Lpovac M, Bodner F, Sch tz A. et al. Increased hyauronan acid binding ability of spermatozoa indicating a better maturity, morphology, and higher DNA integrity after micronutrient supplementation // European Medical Journal Urology, 2014. Vol. 1. P. 60-65.
30. Aitken R.J., De Iuliis G.N. On the possible origins of DNA damage in human spermatozoa // Mol Hum Reprod. 2010. Vol. 16. P. 3-13.
31. Agarwal A., Nallella K.P., Allamaneni S.S. et al. Role of antioxidants in treatment of male infertility: an overview of the literature // Reprod Biomed Online. 2004. Vol. 8. P. 616-627.
32. Pourmand G., Movahedin M., Dehghani S. et al. Does L-carnitine therapy add any extra benefit to standard inguinal varicocelectomy in terms of deoxyribonucleic acid damage or sperm quality factor indices: a randomized study// Urology, 2014 Oct. Vol. 84 (4). P. 821-825.
33. De Vos A., Polyzos N.P., Verheyen G., Tournaye H. Intracytoplasmic morphologically selected sperm injection (IMSI): a critical and evidence-based review // Basic Androl. 2013 Nov. Vol. 8, № 23. P. 10.
34. Cassuto N.G., Hazout A., Bouret D. et al. Low birth defects by deselecting abnormal spermatozoa before ICSI // Reprod Biomed Online, 2014 Jan, Vol. 28 (1). P. 47-53.
35. Barazani Y., Agarwal A., Sabanegh E.S. Jr. Functional sperm testing and the role of proteomics in the evaluation of male infertility// J Urol. 2014. Vol. 84. P. 255-261.

Только для зарегистрированных пользователей

С.Ю. Боровец, М.А. Рыбалов, А.Г. Горбачев, С.Х. Аль-Шукри

Скачать PDF

Цель исследования: оценить влияние Простатилена ® АЦ на степень фрагментации ДНК сперматозоидов при лечении больных хроническим абактериальным простатитом с сопутствующими нарушениями репродуктивной функции.

Результаты. До лечения патологическую степень фрагментации ДНК в сперматозоидах диагностировали у 6 (43 %) из 14 пациентов при нормозооспермии и у 7 (63 %) из 11 при патозооспермии (χ² = 1,06; p ® АЦ при лечении больных хроническим абактериальным простатитом способствует снижению степени фрагментации ДНК в сперматозоидах.

Ключевые слова: Простатилен ® АЦ, простатит, бесплодие, фрагментация ДНК

Препарат Простатилен® известен как самостоятельное средство патогенетической монотерапии больных хроническим абактериальным простатитом. Его эффективность обусловлена способностью улучшать микроциркуляцию в предстательной железе за счет антиагрегантного, антикоагулянтного, фибринолитического, тромборезистентного и иммуномодулирующего действия (вследствие стимуляции синтеза антител к гистамину и серотонину, снижения циркулирующих иммунных комплексов в плазме крови и активации фагоцитарной активности), а также благодаря противоотечному действию из-за снижения чувствительности тканей предстательной железы к медиаторам воспаления [1–3]. Препарат Простатилен ® АЦ (суппозитории ректальные) разработан на основе ранее зарегистрированного препарата Простатилен® (суппозитории ректальные, 30мг, РУ ЛС-000925 от 31.05.2010) и отличается введением в композицию субстанции L-аргинина (100мг) и цинка (23мг) в виде хелатного соединения цинка аргинил глицината (180 мг).
Нарушение целостности ДНК сперматозоидов снижает их оплодотворяющую способность и является одной из основных причин, приводящих к остановке развития и элиминации эмбриона на ранних этапах эмбриогенеза [4, 5]. Причиной отсутствия беременности в 20 % случаев мужского идиопатического бесплодия является нарушение целостности ДНК сперматозоидов [6].
По последним данным, в 1/4 случаев замершая беременность на ранних сроках у супруги/половой партнерши возникает по причине повышения фрагментации ДНК сперматозоидов, т. е. она обусловлена мужским фактором [7]. В целом более высокая степень фрагментации ДНК сперматозоидов приводит к снижению уровня рождаемости у семейных пар, получающих помощь по программам вспомогательных репродуктивных технологий [8]. Однако определение степени фрагментации ДНК в сперматозоидах не входит в перечень рутинных методов обследования мужчин на фертильность, в связи с чем это исследование выполняют редко, особенно при нормальных показателях спермограммы и MAR (mixed antiglobulin reaction)-теста [9].
Цель исследования: оценить влияние Простатилена ® АЦ на степень фрагментации ДНК сперматозоидов при лечении больных хроническим абактериальным простатитом с сопутствующими нарушениями репродуктивной функции.

До лечения патологическую степень фрагментации ДНК в сперматозоидах диагностировали у 6 (43 %) из 14 пациентов при нормозооспермии и у 7 (63 %) из 11 при патозооспермии (χ² = 1,06; p ® АЦ (суппозитории ректальные, 30мг + 180мг) способствует снижению степени фрагментации ДНК в сперматозоидах у больных хроническим абактериальным простатитом и сопутствующими нарушениями репродуктивной функции. При этом препарат Простатилен® (суппозитории ректальные, 30 мг) подобной активностью не обладает. К доступным методам коррекции повышенной степени фрагментации ДНК в сперматозоидах относят антиоксидантную терапию, лечение варикоцеле и воспалительных заболеваний мужских половых органов, минимизацию токсических воздействий, в том числе отказ от курения и приема алкоголя.
По результатам нашего исследования выявлена зависимость показателя степени фрагментации ДНК в сперматозоидах от величины MAR-теста до лечения: повышенную фрагментацию чаще выявляют при повышенных значениях MAR-теста. Полученные нами данные совпадают с опубликованными: результатами мультицентровых исследований было доказано, что уровень антиспермальных антител в эякуляте выше в группе мужчин с патологической степенью фрагментации ДНК в сперматозоидах [12].
Результаты нашего исследования также продемонстрировали, что повышение степени фрагментации ДНК в сперматозоидах возможно как при пато-, так и при нормозооспермии, что говорит о необходимости проведения данного исследования всем мужчинам, проходящим обследование на фертильность.
Использование Простатилена ® АЦ позволяет снизить степень фрагментации ДНК в сперматозоидах и улучшить показатели спермограммы у большинства мужчин, страдающих хроническим абактериальным простатитом, что способствует естественному зачатию. Простатилен ® АЦ также может быть рекомендован при подготовке к процедуре экстракорпорального оплодотворения/интрацитоплазматической инъекции сперматозоида.

Простатилен ® АЦ при лечении больных хроническим абактериальным простатитом способствует улучшению фертильных свойств эякулята, нормализации фрагментации ДНК в сперматозоидах и может быть рекомендован для подготовки к процедурам вспомогательных репродуктивных технологий.

Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Боровец С.Ю., Рыбалов М.А., Горбачев А.Г., Аль-Шукри С.Х.

Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Боровец С.Ю., Рыбалов М.А., Горбачев А.Г., Аль-Шукри С.Х.

EFFECT OF PROSTATILEN® AC ON SPERM DNA FRAGMENTATION DURING TREATMENT OF PATIENTS WITH CHRONIC NONBACTERIAL PROSTATITIS AND CONCOMITANT DISORDERS OF THE REPRODUCTIVE FUNCTION

The study objective is to analyze the effect of Prostatilen® AC on sperm DNA fragmentation during treatment of patients with chronic nonbacterial prostatitis and concomitant disorders of the reproductive function.Materials and methods. The study is based on the results of treatment of 25 men aged 24 to 45 years (mean age 35.3 ± 4.4 years) with a verified diagnosis of chronic nonbacterial prostatitis and complaints of early-stage missed miscarriage in a spouse/sexual partner. All patients received Prostatilen® AC daily in rectal suppositories formulation. The duration of treatment was 10 days with retreatment after 20 days. In all patients before treatment and 20 days after it, spermiogram parameters (5th ed., WHO, 2010) and sperm DNA fragmentation level using SCSA (sperm chromatin structure assay) by FACSCantoll with monoclonal antibodies (Roche, Germany) were determined, and all patients underwent the MAR (mixed antiglobulin reaction) test with normal value considered to be 10 % or less. The normal value of sperm DNA fragmentation was considered to be 15 % or less (low risk of fertility impairment). The analysis of the obtained data was carried out using the IBM SPSS Statistics program 22.Results. Before the treatment, pathologic level of sperm DNA fragmentation was observed in 6 (43 %) of 14 patients with normozoospermia and in 7 (63 %) of 11 patients with pathozoospermia (χ² = 1.06; p DNA fragmentation in patients with normoand pathozoospermia. A correlation was found between the level of sperm DNA fragmentation and the results of MAR test before treatment (r = 0.8, p DNA fragmentation was observed in 7 (53 %) of 13 patients with pathological MAR test results, and in 2 (40 %) of 5 patients with normal MAR test results (χ² = 0.67; p DNA fragmentation prior to treatment varied between 1 and 55 % (mean 18.99 ± 6.87 %), and after treatment it varied between 1 and 26 % (mean 9.76 ± 4.32 %). Increased level of sperm DNA fragmentation was observed in 13 (52 %) of 25 patients before treatment with Prostatilen® AC and only in 3 (12 %) patients after the treatment (χ² = 0.86; p Prostatilen® AC as treatment of chronic nonbacterial prostatitis promotes a decrease in the level of sperm DNA fragmentation .

Влияние препарата Простатилен® АЦ на фрагментацию ДНК сперматозоидов при лечении пациентов с хроническим абактериальным простатитом и сопутствующими нарушениями репродуктивной функции

С.Ю. Боровец, М.А. Рыбалов, А. Г. Горбачев, С.Х. Аль-Шукри

Контакты: Сергей Юрьевич Боровец sborovets@mail.ru

Результаты. До лечения патологическую степень фрагментации ДНК в сперматозоидах диагностировали у 6 (43 %) из 14 пациентов при нормозооспермии и у 7(63 %) из 11 при патозооспермии (%2 = 1,06;p Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Для математического анализа данных использовали программу Microsoft Excel 2013. С целью проверки достоверности различий между выборками применяли

вычисление критерия Стьюдента (1-тест для парных и независимых выборок с нормальным распределением), а также критериев Уилкоксона и Манна—Уитни ^ для парных и и для независимых выборок с распределением, отличающимся от нормального), при сравнении частотных величин — х2-критерий Пирсона.

Коэффициент ранговой корреляции Спирмена применялся для исследования корреляционной взаимосвязи между двумя ранговыми переменными. Нормальность распределения в выборках оценивали по 2-критерию Колмогорова—Смирнова. Применяемый порог значимости принимался равным 95 %. Уровень достижения нулевой статистической гипоте-зыр >0,05.

До лечения патологическую степень фрагментации ДНК в сперматозоидах диагностировали у 6 (43 %)

из 14 пациентов при нормозооспермии и у 7 (63 %) из 11 при патозооспермии (%2 = 1,06; р 15 %) Above the threshold level (> 15 %) 6 (43) 7 (63) 1,06 15 %) Above the threshold level (>15 %) 7 (53) 2 (40) 0,67 Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

Min-max, % (M ± m) 1-55 (18,99 ± 6,87) 1-26 (9,76 ± 4,32) — 15 %) Above the threshold level (>15 %) 13 (52) 3 (12) 0,86 Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.

fertility work-up? Reprod Biomed Online 2015;31(2):134-7. DOI: 10.1016/j.rbmo.2015.05.006. PMID: 26096033. 10. Руководство ВОЗ по исследованию и обработке эякулята человека. ВОЗ. 5-е изд. Пер. с англ. Н.П. Макарова. М.: Капитал принт, 2012. [WHO labo-

ratory manual for the examination and processing of human semen. Translation from English by N.P. Makarov. 5th edition. Moscow: Kapital Print, 2012. (In Russ.)].

11. Руководство ВОЗ по стандартному обследованию и диагностике супружеских пар. M.: МедПресс, 1997. [WHO guidelines on standard examination and

diagnosis of married couples. Moscow: MedPress, 1997. (In Russ.)].

12. Bozhedomov V.A., Nikolaeva M.A., Ushakova I.V. et al. Functional deficit of sperm and fertility impairment in men with antisperm antibodies. J Reprodlm-munol 2015;112:95-101. DOI: 10.1016/j. jri.2015.08.002.

e Статья поступила: 20.09.2017. Принята в печать: 13.10.2017. Article received: 20.09.2017. Accepted for publication: 13.10.2017.

Уровень фрагментации ДНК в сперматозоидах человека при варикоцеле и простатите

Варикоцеле и простатит относятся к наиболее распространенным андрологическим заболеваниям, которые могут сопровождаться сниженной продукцией сперматозоидов, ухудшением их качества и повышением риска бесплодия. Целью настоящей работы было оценить у мужчин активного репродуктивного возраста, страдающих простатитом или варикоцеле, индекс фрагментации ДНК сперматозоидов (ИФД) и основные показатели фертильности спермы (концентрация, подвижность и морфология сперматозоидов), а также взаимосвязь между ними. Оценку фрагментации ДНК сперматозоидов проводили методом SCSA (sperm chromatin structure assay) с использованием проточной цитометрии, параметры спермограммы оценивали в соответствии с рекомендациями ВОЗ. Показано, что у мужчин с простатитом (n=9) и варикоцеле (n=22) ИФД был значительно выше, чем в группе контроля (n=22). Установлено негативное влияние этих заболеваний на концентрацию и долю подвижных сперматозоидов в эякуляте. Полученные данные предполагают, что ухудшение качества спермы при варикоцеле и простатите может быть обусловлено не только патоспермией, но и нарушением, по крайней мере частично, целостности ДНК сперматозоидов. Оценка фрагментации ДНК сперматозоидов может быть рекомендована к использованию в лабораторной диагностике для прогноза фертильности мужчин, страдающих бесплодием.

Введение. Важным фактором, влияющим на фертильность мужчины и здоровье его детей, является целостность ДНК в сперматозоидах. Нарушения в генетическом материале сперматозоидов встречаются у мужчин довольно часто. Они включают хромосомные мутации (делеции и анеуплоидию), эпигенетическую модификацию ДНК или гистонов, генные или точечные мутации, окисление нуклеотидных оснований и фрагментацию ДНК [1]. Целостность ДНК в сперматозоидах может нарушаться при дифференцировке мужских гамет при переходе от нуклеосомной организации хроматина к протаминовой укладке, что приводит к возникновению разрывов ДНК, часть из которых остается нерепарированной в зрелых сперматозоидах [2]. Фрагментация ДНК в дифференцирующихся половых клетках семенников может быть частью апоптотического процесса, т.е. фрагментированная ДНК в эякуляторных сперматозоидах может стать результатом незавершенного процесса апоптоза [1–3]. Еще одна возможная причина нарушения целостности ДНК в сперматозоидах – это оксидативный стресс, обусловленный избыточной продукцией свободных радикалов. Оксидативный стресс некоторыми авторами рассматривается как главный механизм, приводящий к появлению в эякуляте сперматозоидов с фрагментированной ДНК [3–5]. При некоторых патологических состояниях, связанных с воспалением, масса незрелых половых клеток и лейкоцитов попадает в эякулят, где служит основным источником свободных радикалов, усиливая процесс фрагментации ДНК в зрелых сперматозоидах [6, 7].

Целостность ДНК сперматозоидов необходима для передачи генетической информации, успешной беременности и обеспечения хорошего здоровья будущего поколения. Обнаружен ряд этиологических факторов, ассоциированных с фрагментацией ДНК и ослаблением целостности хроматина в сперматозоидах. К ним относятся курение, радиация, химиотерапия, загрязнение окружающей среды, а также патофизиологические состояния – лейкоцитоспермия, варикоцеле, рак семенников [3, 8–12]. Интересно отметить, что яйцеклетка способна в некоторой степени репарировать повреждения ДНК сперматозоидов, но если такие повреждения существенны, потенциала яйцеклетки может быть недостаточно для обеспечения нормального развития эмбриона [9].

Анализ фрагментации ДНК сперматозоидов впервые начали применять около 30 лет назад [13]. Стимулом к развитию данной методологии стал поиск причин мужского бесплодия, лежащего за пределами, объясняемыми параметрами спермограммы. Другим важным фактором было все более широкое использование вспомогательных репродуктивных технологий (ВРТ), где для повышения шансов беременности потребовались дополнительные предикторы мужской фертильности, а успешность оплодотворения считалась важным критерием оценки ВРТ. Поиск оптимальных предикторов мужской фертильности способствовал развитию нескольких методов оценки целостности ДНК сперматозоидов, однако наибольшее распространение получил метод структурной оценки хроматина сперматозоидов – SCSA (sperm chromatin structure assay) – из-за небольшой индивидуальной вариации и относительного постоянства во времени индекса фрагментации сперматозоидов [1, 3, 13].

Простатит и варикоцеле относятся к наиболее часто встречающимся приобретенным урологическим заболеваниям. Простатит чаще всего развивается в хронической форме на протяжении нескольких лет. Основная причина болезни состоит в формировании в железе инфекционного очага, но нередко встречается простатит неинфекционного характера. Распространенность хронического простатита составляет 10–15% в общей популяции мужчин в возрасте от 20 до 50 лет, причем у молодых мужчин больше распространен асимптоматический инфекционный простатит [14, 15]. У трети больных простатит бывает осложнен везикулитом, эпидидимитом и орхитом [16]. Риск развития простатита увеличивается с возрастом. Наряду с ожирением, метаболическим синдромом, сахарным диабетом 2 типа, эректильной дисфункцией и андрогенным дефицитом некоторые авторы относят хронический простатит к возраст-ассоциированным заболеваниям, между которыми имеются патогенетические связи [16, 17].

Варикоцеле проявляется расширением вен лозовидного сплетения яичка как следствие органной венной почечной гипертензии и первичной недостаточности стенки семенниковой вены. Чаще всего варикоцеле локализуется на левой стороне. Распространенность клинического варикоцеле у мужчин составляет около 15%, наиболее часто заболевание встречается в возрасте от 15 до 25 лет, тогда как в преклонном возрасте диагностируется относительно редко [11, 12, 18]. Развитие варикоцеле зависит от многих факторов, включая возраст, характер труда и даже этническую принадлежность. Часто варикоцеле развивается у мальчиков в период полового созревания одновременно с увеличением яичек [19]. Варикоцеле встречается среди лиц различных профессий, но чаще болеют работники физического труда. Длительный застой венозной крови ведет к гипоксии, развитию склеротических изменений и повреждению гематотестикулярного барьера в семенниках, усилению интенсивности перекисного окисления липидов [19].

Имеется довольно много сообщений о негативном влиянии простатита и варикоцеле на мужскую фертильность. Установлено, что варикоцеле может являться причиной первичного и вторичного бесплодия и наблюдается у 35–50% пациентов с бесплодием [12, 18]. Взаимосвязь между простатитом и бесплодием у мужчин остается неясной, однако сопровождающие это заболевание лейкоцитоспермия, повышенный уровень реактивных форм кислорода в семенной жидкости, иммунологические отклонения должны рассматриваться как кофакторы в развитии бесплодия у пациентов с простатитом [20, 21]. Как простатит, так и варикоцеле могут сопровождаться ухудшением параметров спермограммы, хотя имеющиеся данные часто противоречивы [11, 19, 20, 22, 23]. Вредные привычки, например курение, пациентов с варикоцеле ухудшают показатели спермограммы, повышают активность перекисного окисления липидов и сопровождаются изменениями протеома семенной жидкости [24]. Клинические исследования демонстрируют, что после варикоцелэктомии у пациентов улучшаются параметры спермограммы, а в случае бесплодия повышается успешность ВРТ [18, 25]. Таким образом, описанные андрологические заболевания могут оказывать существенное влияние на мужскую фертильность, однако требуются дополнительные исследования, проясняющие и уточняющие их патофизиологические и эпидемиологические аспекты.

Помимо ухудшения параметров спермограммы и других репродуктивных нарушений негативные эффекты варикоцеле и простатита на мужскую фертильность могут включать нарушение целостности ДНК сперматозоидов [10, 12, 25, 26]. В дополнение к стандартным параметрам спермограммы оценка степени повреждения ДНК в сперматозоидах, несомненно, дает дополнительную диагностическую и прогностическую информацию о репродуктивном потенциале мужчины. Тем не менее необходимы исследования, устанавливающие референтные значения уровня повреждения ДНК сперматозоидов в норме и при различных патологических состояниях, чтобы обосновать необходимость использования различных методов оценки целостности ДНК сперматозоидов в рутинной лабораторной диагностике для диагностических и прогностических целей.

Цель настоящего исследования состояла в оценке уровня фрагментации ДНК сперматозоидов у мужчин, страдающих варикоцеле и хроническим простатитом, методом SCSA с использованием проточной цитометрии и основных показателей фертильности спермы (концентрация, подвижность и морфология сперматозоидов), а также взаимосвязи между ними.

Материалы и методы. Исследование проведено на 53 мужчинах-добровольцах активного репродуктивного возраста, которых рекрутировали по объявлению в сети Интернета и после публичных лекций по мужскому репродуктивному здоровью. Условия для включения добровольцев в группу испытуемых были следующими: они должны были постоянно проживать в Новосибирске, на момент исследования быть клинически здоровыми, не проходить медикаментозного лечения, воздерживаться от половых контактов и употребления алкоголя в течение 2–3 суток до начала обследования. Каждый мужчина был ознакомлен с методами и целями исследования, после чего дал свое письменное согласие на обследование. Все испытуемые проходили физикальный осмотр врачом-андрологом, анкетирование, антропометрию (рост и масса тела). Физикальное обследование включило оценку состояния наружных половых органов, измерение битестикулярного объема (БТО) орхидометром Прадера, пальпацию и ректальное исследование простаты, включая оценку размера, выраженность срединной бороздки, однородности, консистенции, болезненности. Из исследования исключили мужчин с азооспермией, крипторхизмом, гипоспадией, кистами придатков и семенников. Анкета включила демографические и этнические характеристики, социальный статус, профессию. Индекс массы тела (ИМТ) рассчитан по формуле: масса тела (кг)/рост (м2). Возраст испытуемых составил от 20 до 45 лет (средний возраст – 30,5 ± 0,9 года). Почти все обследованные принадлежали к славянской этнической группе.

В результате беседы с андрологом, сбора жалоб и анамнеза, а также физикального осмотра у 31 мужчины были клинически диагностированы простатит или варикоцеле, в некоторых случаях с жалобами на бесплодие. В группу мужчин с простатитом вошли 9 человек, имеющих хроническую форму заболевания, а в группу с варикоцеле – 22 мужчины, имеющих, как правило, варикоцеле слева различных стадий. У двух мужчин были диагностированы одновременно простатит и варикоцеле, одного из них включили в группу с варикоцеле из-за слабых клинических проявлений конгестивного простатита, а другого – в группу с простатитом из-за сочетанного проявления простатита и воспаления придатков.

Контрольная группа была представлена 22 мужчинами без урогенитальных заболеваний в анамнезе, не имеющих жалоб на репродуктивное здоровье, с нормальными показателями спермограммы (концентрация, подвижность и морфология сперматозоидов), согласно критериям ВОЗ [27].

Три группы мужчин (с варикоцеле, простатитом и контроль) сравнивали по ИФД, антропометрическим, гормональным и сперматогенным показателям с использованием однофакторного дисперсионного анализа (пакет компьютерных программ STATISTICA, версия 6.0). Для всех исследуемых показателей рассчитывали среднюю арифметическую и ошибку средней (Mean±SE), медиану (Median), 25-й и 75-й квартили. Для выявления взаимосвязи между ИФД и показателями спермограммы рассчитывали коэффициенты корреляции по Пирсону. Критический уровень значимости при проверке статистических гипотез принимали равным 0,05.

Результаты. Рост, масса тела и индекс массы тела, возраст начала половой жизни и сексуальная активность мужчин трех групп не различались. Возраст мужчин с простатитом был достоверно выше, чем в контроле, что отражает общую тенденцию возрастного проявления этого заболевания (табл. 1). Установлено, что БТО был достоверно ниже у мужчин с простатитом по сравнению с контролем (табл. 1).

Следует отметить, что доля женатых мужчин в группах составила от 73 до 89%, однако имели детей лишь от 18 до 33% испытуемых (p>0,05).

Выявлено достоверное снижение некоторых параметров спермограммы при андрологических заболеваниях (табл. 2). Концентрация сперматозоидов была достоверно ниже в группе лиц с простатитом по сравнению с контролем (p 0