Рак молочной железы можно классифицировать в просвете A, просвете B, HER2 + / ER-, базальноподобных и нормальных подтипах на основе профилирования экспрессии генов или иммуногистохимических характеристик (IHC). Цель нашего исследования — показать молекулярный профиль, характерный для рака молочной железы в североафриканском населении Марокко. Эта работа показала предварительные результаты и корреляции с клинико-патологическими и гистологическими параметрами. Триста девяносто первичных опухолевых тканей карциномы молочной железы были иммунизированы для ER, PR, HER2, CK5 / 6, CK8 / 18 и Ki67 с использованием парафиновой ткани.
Мы рассмотрели 390 случаев рака молочной железы, диагностированных с января 2008 года по декабрь 2011 года в Отделе патологии, в больнице Хассана II, Фес, Марокко. Изучены возрастная опухоль, размер опухоли, метастатический профиль, профиль поражения узлов, гистологический тип и иммуногистохимический профиль.
Средний возраст составлял 46 лет; наши пациенты были ранены с высоким средним размером опухоли. Подтип Luminal B был более распространенным (41,8%), за ним наблюдали просвет A (30,5%), базальноподобный (13,6%), Her2-сверхэкспрессирующий (9,2%) и неклассифицированный подтип (4,9%).
Это исследование показало, что молекулярная классификация и биологический профиль могут отличаться в зависимости от географического распределения, чтобы поощрять дальнейшие исследования, чтобы знать геномный профиль опухолей и окружающей среды.
Рак молочной железы является гетерогенным заболеванием, так что они могут иметь разные прогнозы и реагировать на терапию по-разному, несмотря на сходство в гистологических типах, степени и стадии. Основываясь на наличии или отсутствии экспрессии рецептора эстрогена (ER), рак молочной железы делится на две группы: ER + и ER-. Профиль генетической экспрессии выявил два подтипа ER + опухолей: просвет A и просвет B. B. ER-опухоли также включают два подтипа, HER2 + и базальный тип. Эти подтипы различаются по своей биологии, и оба они демонстрируют короткие периоды без болезней после лечения и более слабый исход. В Марокко это первый рак у женщин и в настоящее время является серьезной проблемой общественного здравоохранения. Молекулярная классификация карцином молочной железы в настоящее время основана на анализе экспрессии генов с использованием микрочипов ДНК и позволяет идентифицировать по меньшей мере пять групп: просвет A, просвет B, гиперэкспрессирующий HER2, базальноподобный и нормальный грушевидный 3. Однако крупномасштабный подтипирование с использованием профилирования экспрессии генов из фиксированных формалином образцов, встроенных в парафин, в настоящее время не реализуется и остается очень дорогостоящим. Поэтому иммуногистохимические маркеры использовались в качестве суррогатных инструментов для микрочипов ДНК при подтипировании рака молочной железы [4,5]. В нескольких исследованиях регулярно использовались панели иммуногистохимических маркеров для классификации рака молочной железы в подтипах, аналогичных тем, которые были определены ранее с использованием анализа экспрессии генов [6]. Недавнее исследование было проведено Prat et al. [4]. Они определили несколько иммуногистохимических подтипов: (просвет A, Luminal B, HER2-обогащенный, базальноподобный) и нормальную группу, похожую на грудную клетку, которая показывает значительные различия в заболеваемости, выживаемости и реакции на терапию. Luminal A (ER положительный (ER +) и / или PR-позитив (PR +), Her2 отрицательный (Her2-)) с ki67 14%, Her2 положительный или отрицательный ( Her2 +/-), Her2 + / ER — подтип (Her2 +, ER-, PR-) и базальноподобный (ER-, PR-, Her2-, Cytokeratin 5/6 положительный (CK5 / 6 +) и / или Her1 + (EGFR ). Опухоли, которые были отрицательными при иммуногистохимическом окрашивании для всех маркеров (ER, PR, Her2, Her1 и CK5 / 6), считались неклассифицированным подтипом [4]. Согласно этой классификации мы провели иммуногистохимическое окрашивание для ER, PR, Her2 , Her1, CK8 / 18, базальные CK5 / 6 и KI67 в парафиновых срезах из блоков рака молочной железы. Целью настоящего исследования было оценить распространенность подтипов рака молочной железы у пациентов северо-восточного региона Марокко и соотнести между клиническими и патологическими характеристиками.
Пациенты это исследование было одобрено Этическим комитетом медицинского центра Хасана II. Были рассмотрены в общей сложности триста девяносто пациентов с диагнозом инвазивная карцинома молочной железы. Клиническая информация была получена из медицинских записей. Рак молочной железы классифицировался в соответствии с Всемирной организацией здравоохранения (ВОЗ, 2003 г.) [7], тогда как гистологическая сортировка и постановка проводились в соответствии с модифицированной классификацией Блума-Ричардсона [8] и Американским объединенным комитетом по раку (AJCC) [9] соответственно.
Секции опухолей депарафинизировали и регидратировали. Блокирование пероксида проводили с 0,4% H2O2. Получение антигена было достигнуто путем отвода тепла с использованием скороварки. После промывки слайды обрабатывали белковым блокирующим агентом (UltraTech HRP, Immunotech), затем инкубировали со следующими первичными антителами: анти-человеческий ER (ER1D5, Immunotech), PR (PR10A9, Immunotech), CK5 / 6 (D5 / 16B4, Cell Marque), CK8 / 18 (RTU-5D3, Novocastra), Ki67 (сотовый маркер SP6). После промывки PBS слайды инкубировали со вторичным биотинилированным антителом (Immunotech). Затем слайды промывали PBS. Затем секторы инкубировали с реактивом стрептавидин-пероксидазы. Окрашивание для слайдов было разработано с использованием Amino-Ethyl-Carbazole (Ultra Tech AEC, Immunotech), а затем слайды были контрастированы с гематоксилином, гидратированы и смонтированы. Для Her2 иммуногистохимическое действие проводили с использованием HercepTest (A0485, Dako) в соответствии с коммерческими инструкциями по применению.
Иммуногистохимические суррогатные биомаркеры молекулярной классификации Иммуногистохимические подтипы были определены следующим образом: Luminal A (ER + и / или PR +, Her2-, KI67 14% ), базальноподобный (ER-, PR-, Her2- и CK5 / 6 +, CK14 +), Her2 + / ER- и неклассифицированный подтип (отрицательный для всех маркеров) (таблица 1). Выражение CK8 / 18 использовалось для подтверждения люминальных подтипов.
Иммуногистохимическая характеристика молекулярных подтипов рака молочной железы
Положительные меры контроля были включены в каждый прогон окраски и состояли из рака молочной железы, который, как известно, выражал каждый из представляющих интерес антигенов. Случаи считались положительными для ER и PR в соответствии с стандартизованными руководящими принципами с использованием отсечения ≥1% окрашенных опухолевых ядер. Исследование флуоресценции in situ гибридизации (FISH)
Все оценки Her2 2+ были проанализированы FISH. Они выполнялись с использованием ДНК-зонда PathVysion HER2 (Abbott Vysis Inc., Downers Grove, IL) в соответствии с протоколом производителя. В зондирующий коктейль включали зонд LSI HER-2 / neu и зонд CEP17. Сигналы флуоресценции анализировались и оцифровывались с использованием системы анализа изображений CytoVisionTM (Applied Imaging International Ltd., Newcastle-Upon-Tyne, UK). Для каждого случая оценивалось от 60 до 100 ядер. Соотношения сигналов (HER2: CEP17) ≥ 2, 2 были классифицированы как усиленные. В отсутствие положительных данных FISH опухоли, отмеченные 2+ по IHC, считались отрицательными для HER-2. Her2 оценивали по шкале от 0 до 3 в соответствии с критериями, установленными ASCO (Американское общество клинической онкологии / колледж американских патологов) [10]. Оценки 0 и 1+ считались отрицательными; оценка 2+ считалась пограничной; и оценка 3+ считалась очень позитивной. FISH выполнялась в пограничных случаях (оценка 2+).
При раке молочной железы иммуногистохимическая оценка доли окрашивания клеток для ядерного антигена Ki67 стала наиболее широко используемым методом сравнения пролиферации между образцами опухолей. Потенциальные применения включают прогноз, прогноз относительной чувствительности или резистентность к химиотерапии или эндокринной терапии, оценку остаточного риска у пациентов при стандартной терапии и как динамический биомаркер эффективности лечения в образцах, взятых до, во время и после неоадъювантной терапии, особенно неоадъювантной эндокринной терапии , Случаи считались положительными для ki67 в соответствии со стандартизованными руководящими принципами с использованием среза ≥14% окрашенных опухолевых ядер с умеренной интенсивностью (рис. 1).
Распределение по индексу распространения, оцениваемому Ки 67.
Статистический анализ проводился в Департаменте эпидемиологии факультета медицины и фармации Феса и проводился с использованием Epi-Info (3.3.2).
Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Семиглазов В.Ф., Палтуев Р.М., Семиглазов В.В., Манихас А.Г., Пеньков К.Д.
Представлены данные о прогнозе и выживаемости больных различными биологическими подтипами рака молочной железы (РМЖ).наиболее благоприятный прогноз и высокие показатели выживаемости оказались при люминальном-А подтипе и чуть хуже при люминальном-В подтипе (HER2-отрицательном). Агрессивное течение заболевания с быстрым развитием висцеральных метастазов и поражением головного мозга наблюдается при HER2-сверхэкспрессирующем и трижды-негативном РМЖ.
Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Семиглазов В.Ф., Палтуев Р.М., Семиглазов В.В., Манихас А.Г., Пеньков К.Д.
Рак молочной железы
JOURNAL OF MALIGNANT TUMOURS
В.Ф. СЕМИГЛАЗОВ1, Р.М. ПАЛТУЕВ1, В.В. СЕМИГЛАЗОВ2, А.Г. МАНИХАС3, К.Д. ПЕНЬКОВ1, К.Ю. ЗЕРНОВ1, И.В. НИКИТИНА1, А.А. БОЖОК1, Д.Е. ЩЕДРИН1, Т.Ю. СЕМИГЛАЗОВА1, А.М. ЕРМАЧЕНКОВА1, И.А. ГРЕЧУХИНА2, Г.А. ДАШЯН1
Представлены данные о прогнозе и выживаемости больных различными биологическими подтипами рака молочной железы (РМЖ).
Наиболее благоприятный прогноз и высокие показатели выживаемости оказались при люминальном-А подтипе и чуть хуже при люминальном-В подтипе (HER2-отрицательном). Агрессивное течение заболевания с быстрым развитием висцеральных метастазов и поражением головного мозга наблюдается при HER2-сверхэкспрессирующем и трижды-негативном РМЖ. Ключевые слова: рак молочной железы, биологические подтипы, прогноз.
12-я Международная конференция по раку молочной железы (РМЖ) в St.Gallen (2011) приняла новый подход к планированию терапии этого заболевания, основанный на распознавании биологических подтипов РМЖ ^оМЫгс^ et а1., 2011).
Как кратко изложено в табл.1, этот подход определения опухолевых подтипов основан на иммуногистохимическом определении рецепторов эстрогенов и прогестерона, сверхэкспрессии HER2 и маркера клеточной пролиферации К1-67.
При этом ясно, что сама клинико-патоморфологи-ческая классификация должна основываться на надежных современных методах определения ее индивидуальных компонентов. Уже опубликованы указания ASCO/CAP по определению рецепторов эстрогенов и прогестерона (Hammond, 2011) и для детекции позитивности HER2 (Wolff, 2007).
Для практического клинического планирования Панель экспертов (эксперты St.Gallen, 2011) (St.Gallen, 2011) поддерживает применение методологии определения ИЕК2-позитивности, рекомендованной FDA (США), и основанной на приемлемых критериях оценки HER2 статуса в основных клинических испытаниях адъювант-ной анти- HER2 терапии (Piccard-Gebhart, 2005; Romond, 2005). Дальнейшие уточнения указаний ASCO/CAP по определению рецепторов стероидных гормонов (ER/PgR) и экспрессии HER2 опубликованы в 2011 г в Journal Clinical Oncology (Hammond, 2011). Индекс клеточной пролиферации Ki-67 представляет более существенный интерес с точки зрения его стандартизации и воспроизводимости, но пока указания по точному определению этого маркера находятся все еще в фазе уточнения (Viale, 2008).
Панель поддержала клинико-морфологи-ческое определение рецепторов эстрогенов, прогестерона, HER2, Ю-67 как важнейших признаков для определения подтипов РМЖ, но не поддержала включение тестов на цитокератины
Биологический подтип (РМЖ) Клинико-патоморфологическое определение (иГХ) Примечание
* — этот показатель значения № 67 получен при сравнении его с данными генного анализа пролиферации как прогностического фактора (Ср1е-ang, 2009). Оптимальные разделительные срезы индекса метки Ю-67 для предсказания эффективности эндокринотерапии или цитотоксической терапии могут варьировать.
** — Некоторые случаи как сверхэкспрессируют так и не экспрессируют НЕ^2 гены.
В работе проанализирована база данных Ракового регистра отделения опухолей молочной железы. База данных включает информацию о больных, получавших лечение в НИИ Онкологии им. Н.Н. Петрова и в Санкт-Петербургском Клиническом онкологическом диспансере с 2000 по 2011 годы. На 2012 год в базе данных зарегистрировано 5102 больных РМЖ. В базе данных содержится следующая информация: возраст на момент операции, мультифокальность или муль-тицентричность опухоли, гистологический тип, стадия заболевания согласно рекомендациям 7 пересмотра AJCC [Edge, 2010], степень гистологической злокачественности, наличие инвазии лимфатических сосудов и выраженного внутри-протокового компонента, уровень экспрессии ER, PR, HER2, вид предоперационного системного лечения, размеры опухоли, определяемые клинически и по данным маммографического и ультразвукового исследования, объем хирургического лечения, вид адъювантного лечения, жизненный статус на протяжении 10-летнего периода наблюдения (жива, умерла, причины смерти, местно-регионарный рецидив [дата], отдаленные метастазы [дата, локализация].
Данные для расчета показателей безрецидивной и общей выживаемости больных были получены посредством прямых телефонных контактов с больными или их родственниками, а так же из базы данных льготных категорий населения, базы данных ЗАГС’ов и МВД Санкт-Петербурга.
Распределение по подтипам РМЖ
В окончательный анализ из общей группы было включено 1188 больных РМЖ I-II стадий (T1-3N0M0 — 54,5%, T1-2N1M0 — 45.5%).
После разделения на биологические подтипы больные распределились следующим образом (рис. 1):
Среди 1188 больных, вошедших в анализ, 369 больных РМЖ IIIa-IIIb стадий получали неоадъю-
Рис.1 Принадлежность больных, вошедших в исследование, к различным биологическим подтипам РМЖ (Нии Онкологии им. Н.Н. Петрова).
■ Люминальный-А — 461 (38,8%)
■ Люминальный-В (HER2-негативный) — 275 (23,1%)
■ Люминальный-В (HER2-позитивный) — 137 (11,5%)
■ HER2-сверхэкспрессирующий (не-люминальный РМЖ)- 90 (7.6%)
■ Трижды-негативный — 225 (19%).
51 больная получила неоадъювантную гормонотерапию (ингибиторы ароматазы).
298 больных получали неоадъювантную химиотерапию схемами, содержащими антраци-клины и таксаны (АТ, ТАС, ТС).
Среди 1188 больных, включенных в исследование, местно-регионарные рецидивы были выявлены у 22 больных. При люминальном-А подтипе местно-регионарные вторичные опухоли выявлены у 3 больных из 461 (0,6%), при люминальном-В НЕК2-положительном у 3 из
Табл.1 Виды хирургического лечения.
Люм-А Люм-В HER2-нег Люм-В HER2-поз HER2-сверхэкспр. Трижды-негативный
Радикальная мастэктомия 303 (65,7%) 211 (76,7%) 107 (78,1%) 79 (87,7%) 172 (76,4%)
Органосохраняющая операция 145 (31.3%) 61 (22,2%) 27 (19,7%) 10 (11,1%) 46 (20,4%)
Реконструктивно- пластические операции 13 (3%) 3 (1,1%) 3 (2,2%) 1 (1,2%) 7 (3,2%)
275 больных (1%), при люминальном-В HER2-сверхэкспрессирующем у 4 из 137 больных (2.9%), при трижды-негативном у 7 из 225 больных (3.1%). Максимальная частота местно-реги-онарного рецидивирования наблюдалась при HER2-сверхэкспрессирующем РМЖ и составила 5% (5 из 91 больных) [табл.2].
В табл. 2 представлены данные, отражающие частоту местно-регионарных рецидивов в зависимости от биологического подтипа и объема хирургического лечения.
Таким образом, при трижды-негативном, HER2-сверхэкспрессирущем и люминальном-В (HER2-положительном) подтипах РМЖ риск местно-регионарного рецидивирования является наиболее высоким как после выполнения органосохраняющей операции, так и после ма-стэктомии. При люминальном-А подтипе не было зарегистрировано ни одного местно-реги-онарного рецидива после выполнения мастэк-томии, после выполнения органосохраняющей операции частота местно-регионарных рецидивов равна 1,8%. При люминальном-В (HER2-отрицательном) РМЖ частота местно-регионар-ных рецидивов составляет 0,4% и 3,1% после выполнения мастэктомии и органосохраняющей операции, соответственно.
Потенциал к отдаленному метастазированию является одним из важных признаков биологического подтипа РМЖ, определяя в конечном итоге выживаемость больных. Всего из 1188 больных отдаленные метастазы в различные органы были выявлены у 139 больных. При люминальном-А РМЖ отдаленные метастазы были выявлены у 23 больной из 461. В группе
люминального-В (HER2-) РМЖ отдаленные метастазы были выявлены у 39 из 275 больных. Таким образом, относительный риск (RR) развития отдаленных метастазов для люминального-В HER2-отрицательного подтипа по сравнению с люминальным-А равнялся RR=2.8 [р Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
локализация mts N Кости n,% Мягкие ткани n,% Висцеральные mts n,% Головной мозг n,%
люминальный-А n=461 23 13, 56% 4, 18% 6, 26% 0
люминальный-В HER2-отриц n=275 39 15, 38% 7, 18% 16, 41% 1, 3%
люминальный-В HER2-положит n=137 20 7, 35% 3, 15% 8, 40% 2, 10%
HER2-сверхэкспрессирующий n=90 21 2, 9% 4, 19% 12, 57% 3, 15%
трижды-негативный n=225 36 8, 21% 7, 19% 19, 55% 2, 5%
HER2 зарегистрирована более высокая частота метастазирования в головной мозг по сравнению с больными люминальными-В HER2 негативными опухолями (10% против 3%, р 0.5)
Рис. 2 Общая выживаемость больных РМЖ в зависимости от принадлежности к различным биологическим подтипам (Kaplan-Meier)
о Complete Censored
1 4rni- Г 1— 1 la;— 1 j О
5Gu 1000 1500 2000 Время ¡дни)
Значение р при сравнении люминального А подтипа с остальными подтипами Не можете найти то, что вам нужно? Попробуйте сервис подбора литературы.
1. Семиглазов В.Ф., Манихас А.Г., Семиглазова Т.Ю., Бессонов А.А., Семиглазов В.В. Неоадъювантная системная терапия рака молочной железы. (руководство) Аграф, 2012. — 112 стр.
4. Cheang MCU, Chia SK, Voduc D, Gao D, Leung S, Snider J, Watson M, Davies S, Bernard PS, Parker JS, Perou CM, Ellis MJ, Nielsen TO. Ki67 index, HER2 status, and prognosis of patients with luminal B breast cancer. J Natl Cancer Inst. 2009. — Vol.101. — P.736-750
5. Goldhirsch A., Wood W. C., Coates A. S., et al. Strategies for subtypes—dealing with the diversity of breast cancer: highlights of the St Gallen International Expert Consensus on the Primary Therapy of Early Breast Cancer 2011 Ann Oncol. 2011 August. -Vol.22(8). — P. 1736-1747
7. Perou CM, Sorlie T, Eisen MB et al. Molecular portraits of human breast tumours. Nature 2000; — Vol.
8. Piccart-Gebhart MJ, Procter M, Leyland-Jones B et al. Trastuzumab after adjuvant chemotherapy in HER2-positive breast cancer. N Engl J Med 2005; — Vol. — 353: pp. 1659-1672.
9. Romond EH, Perez EA, Bryant J, et al. Trastuzumab plus adjuvant chemotherapy for operable HER2-positive breast cancer. N Engl J Med 2005; — Vol. — 353: pp.1673-1684.
10. Viale G, Regan MM, Mastropasqua MG et al. Predictive value of tumor Ki-67 expression in two randomized trials of adjuvant chemoendocrine therapy for node-negative breast cancer. J Natl Cancer Inst 2008;