Аннотация научной статьи по клинической медицине, автор научной работы — Боброва Т. С., Жорданиа К. И., Чуев Ю. В.
With the help of monoclonal antibodies (MCA-1, MCA-3, G1 class immunoglobulins) and polyspecific antiserum (As) by means of immunoblotting (IB) the increase of the expression of the tumor-associated proteins (TAP) in the samples of the tumor tissues (in 94, 55 and 38% respectively), metastatic lymph nodes LN(m+) and sera of the patients with ovarian cancer (OC) (in 82, 77 and
100% of the cases, respectively), was detected. The important feature of As was the reactivity with the samples of the LN (m+) on the numerous proteins (>5-10) in 78% of the patients. The statistical analysis of the data using Student t-criterion revealed the significant differences (MCA-1, MCA-3) in the expression of the markers in the tumor tissues and blood sera of the oncological patients comparing with the samples of the adjacent tissues, blood sera of the patients with the other tumor localization and healthy donors (p test-system for the immunodiagnostics of the OC and determination of the stage of the tumor process.
Похожие темы научных работ по клинической медицине , автор научной работы — Боброва Т. С., Жорданиа К. И., Чуев Ю. В.
Expression of the tumor-associated proteins in the ovarian cancer
With the help of monoclonal antibodies (MCA-1, MCA-3, G1 class immunoglobulins) and polyspecific antiserum (As) by means of immunoblotting (IB) the increase of the expression of the tumor-associated proteins (TAP) in the samples of the tumor tissues (in 94, 55 and 38% respectively), metastatic lymph nodes LN(m+) and sera of the patients with ovarian cancer (OC) (in 82, 77 and
100% of the cases, respectively), was detected. The important feature of As was the reactivity with the samples of the LN (m+) on the numerous proteins (>5-10) in 78% of the patients. The statistical analysis of the data using Student t-criterion revealed the significant differences (MCA-1, MCA-3) in the expression of the markers in the tumor tissues and blood sera of the oncological patients comparing with the samples of the adjacent tissues, blood sera of the patients with the other tumor localization and healthy donors (p test-system for the immunodiagnostics of the OC and determination of the stage of the tumor process.
ЭКСПРЕССИЯ ОПУХОЛЬАССОЦИИРОВАННЫХ БЕЛКОВ ПРИ РАКЕ ЯИЧНИКА
Т.С. Боброва, К.И. Жорданиа, Ю.В. Чуев
ГУРОНЦ им. Н.Н. Блохина, РАМН, Москва
EXPRESSION OF THE TUMOR-ASSOCIATED PROTEINS IN THE OVARIAN CANCER T.S. Bobrova, K.I. Zhordania, Yu.V. Chuyev
N.N. Blokhin Cancer Research Center of Russian Academy of Medical Sciences, Moscow
With the help of monoclonal antibodies (MCA-1, MCA-3, G1 class immunoglobulins) and polyspecific antiserum (As) by means of immunoblotting (IB) the increase of the expression of the tumor-associated proteins (TAP) in the samples of the tumor tissues (in 94, 55 and 38% respectively), metastatic lymph nodes — LN(m+) and sera of the patients with ovarian cancer (OC) (in 82, 77 and
100% of the cases, respectively), was detected. The important feature of As was the reactivity with the samples of the LN (m+) on the numerous proteins (>5-10) in 78% of the patients. The statistical analysis of the data using Student t-criterion revealed the significant differences (MCA-1, MCA-3) in the expression of the markers in the tumor tissues and blood sera of the oncological patients comparing with the samples of the adjacent tissues, blood sera of the patients with the other tumor localization and healthy donors (p 10 МДа). Кроме того, FceRI ассоциируется с Src-родственными ПТК р53/56 1уп и перекрестно реагирует с другой им же индуцированной ПТК — рр60 c-Src. Эти и другие киназы фосфори-лируют клеточные субстраты, включая бета-и гамма-субъединицы FceRI, рр72 [10]. Также, исследуя активность РТКв, другие авторы заключили, что ее снижение угнетает рост РЯ человека (модель была воспроизведена на nude-мышах) [9].
В качестве новых потенциальных маркеров рассматривают тканевые калликреины, так как обнаружены их повышенные сывороточные уровни у больных РЯ. Однако уже установлено — чувствительность реакции даже в сочетании с СА-125 у этих маркеров не превышает 73% у больных всех стадий РЯ [11].
Цель настоящей работы — исследование методом иммуноблоттинга (ИБ) распределения опу-хольассоциированных белков (ОАСБ) в образцах опухолевых тканей, в условно нормальных тканях (УНТ), тканях лимфатических узлов (с метастазами и без метастазов) — ЛУ(м+) и ЛУ(м-), сыворотке крови у больных РЯ как для характеристики опухоли, так и для исследования возможностей использования полученных данных для диагностики, прогноза и/или мониторинга.
Материалы и методы
Образцы опухолевых тканей и ткани, взятые на расстоянии 5 см от опухоли, получены из отдела патологической анатомии; сыворотки больных и здоровых доноров — из лаборатории биохимии НИИ клинической онкологии ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН. Данные по гистологическим диагнозам, распределению по стадиям опухоли и проведенному лечению больных получены из архивов патологоанатомического отдела и НИИ клинической онкологии. Исследовано 32 образца опухолевых тканей яичника. Возраст больных колебался от 33 до 75 лет. Аденокарциномы РЯ были представлены серозной (п=17), муци-нозной (п=2), эндометриоидной (п=3) и другими гистологическими формами (п=10). Исследованы также ткани ЛУ(м+) (п=15), доброкачественные опухоли яичников (п=4), УНТ (п=6). С учетом стадии заболевания больные распределились следующим образом: I (п=7), II (п=2), III (п=20) и IV (п=1). Среди образцов опухолевых тканей 2 образца было от больных после проведенной ранее хи-миолучевой терапии. В работе использованы также ткани опухолей с другой локализацией: РМЖ (п=3), рак легкого (РЛ, п=1), рак почки (РП, п=2), рак кишечника (п=1), рак пищевода (п=1) с соответствующими УНТ
Получение лизатов клеток. Для получения лизатов образцы опухолевых тканей, ткани ЛУ и УНТ обрабатывали с использованием буфера, содержащего 100 ммоль/л №0, 0,1% SDS, 10 ммоль/л трис^О фШ,5), 1 ммоль/л ЭДТА, 0,5% тритон, 1 ммоль/л PMSF, 0,02% азида натрия. Лизаты центрифугировали при 10 тыс. g в течение 10 мин [12].
Сыворотки крови больных. Для поиска мембранных белков сыворотки крови подвергали ультрацентрифугированию при 125 тыс. g в течение 1 ч. Осадок растворяли в буфере для нанесения образцов с 2% 2-р-меркапэтанолом (2-МЕ) и подвергали электрофорезу в 8% ПААГ по Laemmli [12, 13].
В работе были использованы также сыворотки здоровых доноров (ЗД) и больных с соматическими заболеваниями (СЗ, п=10).
Антисыворотки. Антисыворотка Ас-1 получена к 3M KQ-экстракту клеток НЕр-2 (карцинома гортани, HeLa-подобная); Ас-2 — к полосе преципитации между Ас-1 и образцом УНТ слизистой оболочки желудка человека [12, 14]; Ас-4 (мышиная) — к белкам из 2 образцов РЯ человека. Мышам четырехкратно вводили в область шеи препарат белка, состоящий из пула двух образцов РЯ (цистаденокарциномы), по 100 мкг на инъекцию. Через неделю после последней инъекции брали кровь из орбитальной вены, предварительно усыпив мышей эфиром.
Меченные ФИТЦ и пероксидазой антисыворотки к иммуноглобулинам кролика мыши получены из ГУ НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи.
Моноклональные антитела. МКА-1 (1F3-2D4) и гибридомы — 4В8, 2Д7, 1Д3, 4С6 (мышиные, IgG1) — получены к мембранным белкам клеток НЕр-2 [12, 14]; МКА-3 — к аффинно-очищенным (с использованием Ас-2) белкам из образца УНТ слизистой оболочки желудка человека. Асциты получены с помощью введения гибридомных клеток мышам BALB/c, предварительно обработанных 0,5 мл пристана. Фракции иммуноглобулинов, выделенные из асцитов, очищали с помощью ионнообменной хроматографии и использовали в дальнейшей работе.
|р 250 — множественные белки) в 20 из 30 (67%) образцов опухолевых тканей.
На рис. 1, а показана позитивная реактивность для МКА-1 и Ас-4 с р34 из образца РЯ. В других образцах РЯ Ас-4 реагирует позитивно еще и с низкомолекулярными компонентами — р14—16. Не выявлено положительной реакции с ОАСБ из образца РЯ с помощью других гибридом.
Рис. 1. Выявление ОАСБ в образцах опухолевых тканей и сыворотках крови онкологических больных методом ИБ с помощью: а — Ас-4, МКА-1 и других гибридом; б — МКА-1 в редуцирующих и нередуцирующих условиях. образцы 2, 6 — р34-38 выявлены в образце опухолевой ткани яичника с помощью АС-4 и МКА-1 соответственно; 1, 3, 4, 5— другие гибридомы — 4В8, 2Д7,1Д3, 4С6; образцы: 1 — карцинома яичника № 7 (серозный двусторонний рак,
Т1сЫ х МО); 2—5 — метастазы и карцинома яичника № 5 (двусторонняя малодифференцированная цистаденокарцинома, Т3Ы х МО) в редуцирующих (2, 4) и нередуцирующих (3, 5) условиях соответственно; 6—9 — метастазы и карцинома яичника №4 в редуцирующих и нередуцирующих условиях (гранулезоклеточная опухоль, ТШ х МО) соответственно
На рис. 1, б показана позитивная реакция в районе р34, выявленная с помощью МКА-1 с образцами карцином яичника №7, 5 (с метастазами в редуцирующих), и не выявлено позитивной реактивности по каким-либо белкам в нередуцирующих условиях. Помимо р34, в 2 образцах карцином (№5 и 4) и их метастазах выявлены р72—74 только в редуцирующих условиях. Интенсивность реакции по р34, р72—74 в редуцирующих условиях в образце ткани метастаза была больше, чем в нередуцирующих условиях.
Ранее нами показано, что при исследовании образцов опухолевых тканей с другой (нежели РЯ) локализацией с помощью МКА-1 позитивная реактивность была выявлена в 47% случаев [12, 14]. Таким образом, специфичность выявления ОАСБ с помощью МКА-1 составляет 53%.
Умеренная положительная реакция отмечена в 2 (33%) из 6 образцов УНТ яичника и в 1 (25%) из 4 образцов доброкачественных опухолей яичника. Сравнение данных по выявлению ОАСБ в опухолевых тканях яичника с помощью МКА-1 с выявлением ОАСБ в УНТ и тканях доброкачественных опухолей показало, что различия в экспрессии ОАСБ статистически достоверны (р=0,015 и р=0,002 соответственно).
С помощью Ас-4 было исследовано 19 образцов тканей РЯ и в 9 (47%) из них обнаружена позитивная реакция по р14, р25—28 и/или р53. Умеренная и интенсивная реакция выявлена в 9 (60%) из 15 образцов серозного РЯ, в 11 (92%) из 12 образ-
Таблица 1. Выявление экспрессии ОАСБ с помощью МКА-1 методом ИБ в образцах опухолевых тканей у больных РЯ и сравнение с выявлением их в УНТ и тканях доброкачественных опухолей яичника
РЯ, гистологические типы, стадии болезни
Число позитивных случаев (р34, р25—28 кДа)
Аденокарциномы серозная муцинозная эндометриоидная другие типы
Читаю большое исследование о том, что растительная (безбелковая) диета снижает риск развития рака. Применяется ли такая диета при лечении онкологических больных или для профилактики рака?
Евгения С., Москва
Этот вопрос поставлен неправильно. Дело в том, что растительная диета может содержать и, как правило, содержит белок. Более того, многие растительные продукты (например, орехи, некоторые злаки и семена бобовых культур) содержат белок в более высокой концентрации, чем продукты животного происхождения.
Человеческий организм не в состоянии синтезировать белок, а так как белок является незаменимым компонентом клеточных структур живых существ на планете Земля, безбелковую диету можно назвать несовместимой с жизнью. Безбелковая диета теоретически может предотвратить развитие рака, но практически приведет к смерти от истощения.
Вопрос скорее не в том, употреблять ли белок в пищу или нет, а в том, какой белок употреблять, кому и в каком количестве.
Связь между количеством белка в диете и здоровьем очень непростая. При заболеваниях, связанных с белковым обменом (например, при циррозе печени, почечной недостаточности и некоторых генетически обусловленных болезнях обмена веществ), количество белка в диете должно быть ограничено. С другой стороны, больным с усиленным обменом белка (при тяжелых травмах, ожогах, заражении крови и некоторых злокачественных болезнях) человеку может потребоваться больше белка, чем среднестатистическим здоровым людям.
Недостаточное количество белка в детском возрасте ведет к отставанию физического и умственного развития. Недостаток белка в диете у спортсменов и людей, занимающихся тяжелым физическим трудом, ведет к истощению, а избыточное количество белка в диете в зрелом и пожилом возрасте, возможно, ведет к развитию заболеваний, включая злокачественные.
Знакомый биолог рассказал мне, что диета с большим содержанием молока и мяса (то есть животных белков) может спровоцировать рак. Правда ли это?
Ирина Васелюк, Москва
Недавно опубликованное исследование показало следующее: если в рационе людей от 50 до 65 лет более 20% калорий приходилось на белок преимущественно животного происхождения, то риск заболевания раком увеличивался в 4 раза. При этом исследователи не дифференцировали белки разного происхождения (например, мясо млекопитающих животных или рыб). Исследователи объяснили отмеченный эффект стимуляцией выработки гормона роста в ответ на большое количество белка в диете. А гормон роста оказывает стимулирующий эффект абсолютно на все клетки в организме, в том числе и злокачественные, которые время от времени появляются у каждого человека. Значит, описанный выше рацион приводит к возникновению злокачественных заболеваний. Логично? Да, но делать далеко идущие выводы на основании этого исследования будет ошибочно.
Дело в том, что в биологических науках статистическая связь между какими-то феноменами или явлениями не означает связь между причиной и следствием. Связь между употреблением большого количества белка и развитием рака не означает, что употребление умеренного количества белка обязательно приведет к снижению заболеваемости раком.
Вот один из недавних примеров ошибочной взаимосвязи. Первые отчетливые признаки аутизма проявляются у ребенка в возрасте около полутора лет, то есть примерно в том же возрасте, когда ребенку делают прививку от кори. Исследователи опубликовали это наблюдение, вслед за которым родители детей с аутизмом бросились судить компании, производящие вакцины от кори. Многие выиграли миллионные иски. Понадобилось почти десять лет, чтобы после сотен исследований ученые доказали, что эта хронологическая связь была случайной. В медицине таких парадоксов много, поэтому, перед тем как сделать вывод о роли белка в развитии злокачественных болезней, надо провести масштабное исследование. В нем должны принимать участие люди, схожие по важным биологическим показателям, включая возраст, расу, пол, вес, рост, профессию, содержание жиров и витаминов в диете, употребление табака, алкоголя и прочее. Участников эксперимента необходимо поделить на равные группы и контролировать, насколько строго они придерживаются диеты с разным количеством белка на протяжении многих лет. С практической точки зрения провести такое исследование почти невозможно. Еще большей ошибкой было бы заключение о том, что использование диеты с низким содержанием белка помогает исцелиться от рака. На некоторых стадиях злокачественной болезни, например после серьезной операции, обмен белков резко усиливается, и для полного заживления хирургической раны требуется больше белков, чем обычно.