Цитологическое исследование осадка эякулята. Спермограмма.
Категория обучаемых — врачи КЛД, врачи-лаборанты, биологи.
По окончании обучения выдается удостоверение о повышении квалификации установленного государством образца.
Цикл проводится при условии набора группы не менее 4 человек.
Форма обучения — очная, с применением электронных и дистанционных технологий в первый день и практической подготовки в последующие два дня.
Практическая подготовка проводится на клинической базе РУДН по адресу Москва, ул. Островитянова, 1, стр. 10
Просмотр программы — здесь
Как проходит зачисление на обучение здесь
Документы, необходимые для обучения – здесь
Микроскопическое исследование эякулята включает в себя исследование нативных препаратов, подсчет количества сперматозоидов в счетной камере, определение подвижности сперматозоидов, количества живых и мертвых сперматозоидов, подсчет сперматограммы в окрашенных препаратах.
Микроскопическое исследование нативных препаратов. Не позднее чем через 1 час после эякуляции из разжиженного секрета готовят препарат, нанося пипеткой 1 каплю на чистое сухое предметное стекло. Покрывают эту каплю покровным стеклом и исследуют препарат сначала при малом увеличении (10Х20), а затем — при большом (10Х40).
При микроскопии изучают:
— клеточные элементы эякулята (сперматозоиды, клетки сперматогенеза, эритроциты, лейкоциты, макрофаги, клетки эпителия);
— неклеточные элементы (лецитиновые зерна, кристаллы Беттхера, амилоидные тельца, слизь).
Сперматозоиды представляют собой длинные (55-65мкм) подвижные клетки. В них различают головку, шейку (тело) и хвост. Форма головки овальная или грушевидная, сплюснутая в переднезаднем направлении, размером 5-6мкм. Бóльшую часть головки занимает ядро, хроматин которого состоит из 23 хромосом, ДНК несет 50% генетической информации. Впереди ядра располагается акросома, содержащая энзимы. Шейка короткая, переходит в тело и в хвост, содержащий фибриллы. Они обеспечивают движение хвоста и подвижность сперматозоида. Если в нативном препарате сперматозоиды не обнаруживаются, то эякулят центрифугируют при 3000об/мин в течение 10минут и из полученного осадка готовят препараты. При заболеваниях половых органов (простатите) может наблюдаться агглютинация (склеивание) сперматозоидов. Склеивание единичных сперматозоидов обозначается (1+). Если склеена половина сперматозоидов, но только головками — как (2+). Если половина сперматозоидов склеена хвостами и головками — как (3+), и склеивание почти всех сперматозоидов – как (4+). В нормальном эякуляте агглютинации не наблюдается.
Клетки сперматогенеза. Сперматогонии, сперматоциты и сперматиды в нативных препаратах плохо отличимы от лейкоцитов. Их исследуют в окрашенных препаратах. В норме они составляют 0,5-2%.
Эритроциты.В норме эритроциты отсутствуют или бывают единичными в препарате. Гемоспермия (наличие большого количества эритроцитов в сперме) может быть при воспалительных процессах половых органов.
Лейкоциты.Обычно в эякуляте встречаются единичные в поле зрения лейкоциты. Число их увеличивается при воспалительных процессах (эпидидимиты, простатиты, уретриты).
Эпителиальные клеткив нормальном эякуляте могут содержаться в незначительном количестве. Это клетки эпителия мочеиспускательного канала и придатка яичка. Эпителиальные клетки предстательной железы в норме не встречаются, в большом количестве появляются при воспалительных процессах.
Лецитиновые зерна – мелкие матовые образования округлой формы, в нормальном эякуляте содержатся в значительном количестве. Отражают гормональную функцию простаты. При простатите и раке простаты количество их уменьшается, иногда до полного исчезновения.
Кристаллы Беттхера имеют вид бесцветных вытянутых ромбов, представляют собой фосфорнокислую соль спермина. Большое количество их свидетельствует о простаторее.
Амилоидные тельца (конкременты) имеют овальную или округлую форму, характерное слоистое строение с концентрической исчерченностью и мелкозернистую центральную часть. Обнаруживаются при застое секрета предстательной железы, простатите.
Слизь в нормальном эякуляте отсутствует. При простатите появляется большое количество густой слизи, которая обволакивает сперматозоиды и делает их неподвижными.
Микроскопия эякулята в норме: обнаруживают большое количество подвижных сперматозоидов и лецитиновых зерен, могут содержаться эритроциты (единичные в препарате), лейкоциты (единичные в поле зрения) и незначительное количество эпителиальных клеток.
Определение количества сперматозоидов в 1мл и во всем эякуляте
Принцип. Подсчет обездвиженных сперматозоидов в камере Горяева.
Реактивы.Для обездвиживания сперматозоидов используется один из реактивов.
1. 1 мл 40% формалина на 100 мл воды.
2. 1мл 40% формалина + 5г натрия бикарбоната на 100 мл воды.
3. Жидкость Рубенкова: 0,1г основного фуксина + 0,02 краски Романовского + 0,2мл концентрированной карболовой кислоты + 0,1 мл глицерина + 2 мл 96% этилового спирта на 100 мл физраствора. Эта жидкость не только обездвиживает, но и окрашивает сперматозоиды, что позволяет изучить их морфологию
Ход исследования. В пробирку вносят 0,4 мл одной из обездвиживающих жидкостей и 0,02 мл (капилляр Сали) эякулята. Тщательно перемешивают содержимое пробирки и заполняют этой смесью камеру Горяева. Ждут 2-3 минуты для оседания клеточных элементов и подсчитывают сперматозоиды в пяти больших разграфленных квадратах, расположенных по диагонали. Подсчитывают только те сперматозоиды, головки которых лежат внутри квадратов.
Расчет. Подсчитанное число умножают на 10 6 , получая в результате количество сперматозоидов в 1мл эякулята. Затем умножают на объем эякулята и получают общее количество сперматозоидов.
Нормальное количество сперматозоидов: в 1 мл спермы содержится 100-150 ·10 6 сперматозоидов, во всем эякуляте количество сперматозоидов превышает 120·10 6 , в среднем 150-450·10 6 .
Определение количества неподвижных сперматозоидов в счетной камере
Проводят после подсчета общего количества сперматозоидов в 1 мл. Сперма разводится теплым физраствором в 20 раз (0,02 мл спермы + 0,4 мл физраствора). Заполняют камеру Горяева и подсчитывают количество неподвижных сперматозоидов точно так же, как описано выше.
Расчет процентного содержания неподвижных сперматозоидов проводят, исходя из пропорции:
общее количество сперматозоидов в 1мл — 100%
количество неподвижных сперматозоидов — х.
В норме неподвижные сперматозоиды составляют не более 10%.
Подсчет кинезисграммы
Кинезисграмма– это процентное соотношение сперматозоидов с различной подвижностью. Количество подвижных сперматозоидов является главным критерием при оценке их полноценности. Активно подвижные сперматозоиды обладают быстрым поступательным движением с перемещением в поле зрения. Мало подвижные сперматозоиды двигаются медленно, совершая колебательные движения или подергивания на месте. Исследование проводят с ограничителем поля зрения по Фонио.
Ход исследования. На сухое предметное стекло наносят каплю перемешанного эякулята и накрывают его покровным стеклом. Микроскопируют, подсчитывая не менее 100 клеток, отмечая количество активно подвижных (нормокинезис), мало подвижных (гипокинезис) и неподвижных (акинезис) сперматозоидов. Рассчитывают процентное соотношение сперматозоидов с различной подвижностью.
Кинезисграмма в норме. В нормальном эякуляте активно подвижные сперматозоиды составляют 60-90%, мало подвижные – 10-20%, неподвижные – не более 10%.
Для общей визуальной оценки можно использовать шкалу в баллах:
4 — активная подвижность (все сперматозоиды обладают прямолинейной подвижностью со значительной скоростью);
3 – хорошая подвижность (большинство сперматозоидов обладает прямолинейной подвижностью, но скорость её снижена);
2 – посредственная подвижность (небольшое количество сперматозоидов движется поступательно);
1 – плохая подвижность (поступательное движение сперматозоидов отсутствует);
0 – полное отсутствие движения сперматозоидов.
Определение количества живых и мертвых сперматозоидов
Принцип. Метод основан на том, что раствор эозина окрашивает мертвые сперматозоиды, а живые не окрашиваются, так как содержащийся в них фермент дегидраза восстанавливает эозин, который при этом теряет окрашивающие свойства.
Ход исследования.На предметное стекло наносят 1 каплю спермы, рядом – 2 капли 5% водного раствора эозина. Капли смешивают, делают тонкий мазок, высушивают и микроскопируют с иммерсией. Подсчитывают не менее 200 клеток, выделяя при подсчете живые (бесцветные) и мертвые (окрашенные в красно-фиолетовый цвет) сперматозоиды.
В норме эякулят содержит не менее 90% живых сперматозоидов.
Микроскопическое исследование окрашенных препаратов(подсчет сперматограммы).Сперматограмма отражает соотношение количества сперматозоидов с нормальной и патологической морфологией.
Каплю хорошо размешанной спермы помещают на предметное стекло, делают из нее мазок, окрашивают по Паппенгейму и микроскопируют с иммерсией, дифференцируя не менее 200 сперматозоидов.
В норме морфологически неизмененные сперматозоиды составляют 80-85%.
К патологическим формам относятся сперматозоиды с деформированной головкой (макро-, микро-, конические головки, клювовидные, двуглавые с одной шейкой и одним хвостом, без шейки), с несколькими хвостами, без хвоста и т.д.
Нам важно ваше мнение! Был ли полезен опубликованный материал? Да | Нет
Основной целью исследования эякулята является определение способности спермы к оплодотворению и выявление заболеваний и/или патологических процессов, вызвавших соответствующие поражения. Исследование спермы – неотъемлемая часть диагностики бесплодия. Примерно в 47% случаев причиной бездетности семейных пар является мужчина. Причиной бесплодия мужчин могут быть заболевания яичек, простаты, нарушения проводимости семявыводящих путей, заболевания и пороки развития уретры. Исследование семенной жидкости также является одним из тестов при диагностике гормональных расстройств, заболеваний половых органов или пороков их развития.
В норме эякулят представляет собой взвесь сперматозоидов в секрете яичек и их придатков, которая к моменту эякуляции смешивается с секретом предстательной железы, семенных пузырьков и луковично-уретральных желез.
Сперматозоиды составляют около 5% объема спермы, они образуются в семенниках. Приблизительно 60% объема спермы образуется в семенных пузырьках. Это вязкая, нейтральная или слегка щелочная жидкость, часто желтая или даже сильно пигментированная из-за высокого содержания рибофлавина.
Простата производит примерно 20% объема семенной жидкости. Эта жидкость, похожая на молоко, имеет слабокислую реакцию (рН около 6,5), в основном из-за высокого содержания лимонной кислоты. Простатический секрет также богат кислой фосфатазой и протеолитическими ферментами, считается, что протеолитические ферменты отвечают за коагуляцию и разжижение семенной жидкости.
Менее 10–15% объема спермы образуется в придатках яичек, семявыводящих протоках, бульбоуретральных и уретральных железах.
Стандартная спермограмма оценивает физические (макроскопические) и микроскопические параметры эякулята (Табл., рис. 1-3).
| Показатель | Характеристика | Интерпретация |
|---|---|---|
| Цвет | Серовато-беловатый, слегка опалесцирующий | Норма |
| Почти прозрачный | Концентрация сперматозоидов очень низка | |
| Красновато-коричневатый | Присутствие эритроцитов | |
| Зеленоватый | Пиоспермия | |
| Желтоватый | Желтуха, прием некоторых витаминов, при длительном воздержании | |
| Реакция рН | 7,2–7,8, слабо-щелочная | Норма |
| Ниже 7,0 | В образце с азооспермией – наличие обструкции или врожденного двустороннего отсутствия семявыносящих протоков | |
| 9,0–10,0, щелочная | Патология предстательной железы | |
| Объем | 2–6 мл | Норма |
| Менее 1 мл | Андрогенная недостаточность, эндокринные заболевания, сужения и деформации пузырьков, семявыводящих путей |
Условия взятия и хранения образца
Эякулят должен быть получен после, как минимум, 48 ч, но не более 7 дней полового воздержания.
Эякулят, полученный путем мастурбации, необходимо собрать полностью и держать в тепле (20–40 оС). Образец стабилен один час, однако в случае, если подвижность сперматозоидов патологически низкая (менее 25% сперматозоидов с быстрым линейным поступательным движением), срок между получением и анализом образца следует свести к минимуму.
Макроскопическое исследование – определение консистенции, объема, запаха, цвета, вязкости и рН эякулята.
Микроскопическое исследование – изучение в нативном препарате подвижности сперматозоидов и наличия агглютинации, подсчет количества сперматозоидов в камере Горяева, изучение морфологии сперматозоидов, клеток сперматогенеза и дифференциальная диагностика живых и мертвых сперматозоидов в окрашенных препаратах.
Микроскопическое исследование эякулята проводят после полного его разжижения
Для оценки подвижности сперматозоидов рекомендуется использовать простую систему классификации по категориям. Для классификации 200 сперматозоидов последовательно просматривают в 5 полях зрения микроскопа (Рис. 1).
Подвижность каждого сперматозоида классифицируют по категориям, используя следующие критерии:
а) быстрое поступательное движение;
b) медленное и вялопоступательное движение;
c) непоступательное движение;
d) неподвижные сперматозоиды.
Сначала подсчитывают все сперматозоиды категорий а и b в ограниченном участке поля зрения или, если концентрация сперматозоидов низкая, во всем поле зрения (%). Далее в той же области подсчитывают сперматозоиды с непоступательным движением (категория с) (%) и неподвижные сперматозоиды (категория d) (%).
Определять подвижность можно с подсчетом в камере Горяева. Сперму разводят в 20 раз физиологическим раствором, в камере смотрят только неподвижные и малоподвижные сперматозоиды.
Расчет ведут по формуле:
А – общее количество сперматозоидов;
В – количество малоподвижных сперматозоидов;
С – количество неподвижных сперматозоидов.
Отсюда количество активно подвижных сперматозоидов в процентах составляет (Y):
Подвижность сперматозоидов зависит от времени года и суток. Имеются данные, что весной происходит снижение подвижности сперматозоидов (сезонные колебания). При наблюдении за количеством активно-подвижных сперматозоидов в течение суток было отмечено увеличение их количества во второй половине дня (суточные ритмы).
Снижение подвижности сперматозоидов ниже нормы – астенозооспермия. Незначительной степени астенозооспермии – количество активно- и малоподвижных сперматозоидов c поступательным движением в сумме составляет менее 50%, но более 30%.
Подсчет общего количества сперматозоидов проводят в камере Горяева. Общее количество сперматозоидов в эякуляте рассчитывают, умножая количество сперматозоидов в 1мл спермы на объем выделенной спермы.
Нормоспермия – у здорового мужчины в 1 мл эякулята содержится более 20 млн. сперматозоидов.
Полизооспермия – количество сперматозоидов в 1 мл эякулята превышает 150 млн.
Олигозооспермия – в 1 мл эякулята содержится менее 20 млн. сперматозоидов.
Азооспермия – отсутствие сперматозоидов в эякуляте.
Аспермия – в доставленной жидкости нет сперматозоидов и клеток сперматогенеза.
Оценка жизнеспособности может служить контролем точности оценки подвижности сперматозоидов, поскольку процент мертвых клеток не должен превышать (с учетом ошибки подсчета) процента неподвижных сперматозоидов. Наличие большого количества живых, но неподвижных сперматозоидов, может указывать на структурные дефекты жгутиков. Сумма мертвых и живых сперматозоидов не должна превышать 100%.
В большинстве случаев эякулят человека содержит лейкоциты, в основном нейтрофилы. Повышенное содержание этих клеток (лейкоспермия) может свидетельствовать о наличии инфекции и о плохом качестве сперматозоидов. Число лейкоцитов не должно превышать 1106/мл. Подсчет ведут в камере Горяева аналогично подсчету сперматозоидов.
Эякулят кроме лейкоцитов может содержать незрелые половые клетки (клетки сперматогенеза) на разных стадиях созревания: сперматогоний, сперматоцит I порядка, сперматоцит II порядка, сперматид. (рис. 2)
Наличие в эякуляте различных типов незрелых клеток сперматогенеза обычно говорит о его нарушении. Избыток этих клеток является следствием нарушения функции семенных канальцев, в частности, при сниженном сперматогенезе, варикоцеле и патологии клеток Сертоли.
Оценка морфологии сперматозоидов. Для анализа используют мазок, окрашенный гистологическими красителями (гематоксилин, Романовский-Гимза и др.), в котором производят последовательный подсчет 200 сперматозоидов (однократный подсчет 200 сперматозоидов предпочтительней двукратного подсчета 100 сперматозоидов) и выражают в процентах количество нормальных и патологических форм (Рис. 3).
Головка сперматозоида должна быть овальной формы. Отношение длины головки к ее ширине должно составлять от 1,5 до 1,75. Должна быть видна хорошо очерченная акросомная область, составляющая 40–70% площади головки. Шейка сперматозоида должна быть тонкой, составлять 1,5 длины головки сперматозоида и прикрепляться к головке вдоль ее оси. Размеры цитоплазматических капель не должны превышать 1/2 размера головки нормального сперматозоида. Хвост должен быть прямым, одинаковой толщины на всем протяжении и несколько уже в средней части, не закрученным и иметь длину около 45 мкм. Отношение длины головки к длине хвоста у нормальных сперматозоидов 1:9 или 1:10.
Дефекты головки: большие, маленькие, конические, грушевидные, круглые, аморфные, с вакуолями в области хроматина; головки с маленькой акросомальной областью, вакуолизированной акросомой, с несимметрично расположенной акросомой; двойные и множественные головки, головки с компактным строением хроматина и т.д.
Дефекты хвоста: хвосты короткие, множественные, в виде шпильки, сломанные, наклонные (угол больше 90°), неравномерная толщина хвоста, тонкая средняя часть, закрученный конец, закрученный полностью и их любая комбинация. При дифференцированном морфологическом подсчете учитываются только сперматозоиды с хвостами.
Тератозооспермия – увеличение количества патологических форм сперматозоидов выше референсных значений. Выраженная тератозооспермия резко снижает шансы оплодотворения и увеличивает вероятность пороков развития у плода, если оплодотворение произошло. Тератозооспермия обычно сочетается с олигозооспермией и астенозооспермией.
Сперматозоиды, у которых головка заключена в цитоплазматическую каплю, и те, у которых цитоплазматическая капля расположена на шейке в виде шарфа и по отношению к размеру головки составляет более 1/3, выделяются как незрелые или юные. В нормальной спермограмме они составляют около 1%.
Референтные интервалы
- Объем – 2,0 мл или более;
- рН – 7,2 или более;
- концентрация – 20 *106 сперматозоидов/мл или более;
- общее количество – 40 *106 сперматозоидов и более в эякуляте;
- подвижность – 50% или более подвижных (категория а+b); 25% или более с поступательным движением (категория а) в течение 60 мин после эякуляции;
- жизнеспособность – 50% или более живых, т.е. не окрашенных;
- лейкоциты – менее 1 *106/мл.
Классификация показателей эякулята
- Нормозооспермия – нормальный эякулят;
- олигозооспермия – концентрация сперматозоидов ниже нормативных значений;
- астенозооспермия – подвижность ниже нормативных значений;
- тератозооспермия – морфология ниже нормативных значений;
- олигоастенотератозооспермия – наличие нарушений всех трех показателей;
- азооспермия – нет сперматозоидов в эякуляте;
- аспермия – нет эякулята.
Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.
Copyright ФБУН Центральный НИИ Эпидемиологии Роспотребнадзора, 1998 — 2020
! Продолжая использовать наш сайт, вы даете согласие на обработку файлов cookie, пользовательских данных (сведения о местоположении; тип и версия ОС; тип и версия Браузера; тип устройства и разрешение его экрана; источник откуда пришел на сайт пользователь; с какого сайта или по какой рекламе; язык ОС и Браузера; какие страницы открывает и на какие кнопки нажимает пользователь; ip-адрес) в целях функционирования сайта, проведения ретаргетинга и проведения статистических исследований и обзоров. Если вы не хотите, чтобы ваши данные обрабатывались, покиньте сайт.